Frontiers in Medicine

Introduction

A kolonoszkópia a legtöbb betegnél a bélrendszer egészségének értékelésére preferált módszer, és a kolorektális rák diagnózisának arany standardja, amely egyértelműen felfedezi a bélrendszeri elváltozásokat (1). A kolonoszkópia előtt általában bélelőkészítést alkalmaznak annak biztosítására, hogy a bélfalban ne maradjanak olyan maradványok, amelyek befolyásolhatják a vizsgálati folyamatot és az eredményeket a beállított étrend és a kapcsolódó gyógyszerek felhasználásával, és a bélelőkészítés megfelelősége közvetlenül befolyásolhatja a kolonoszkópia végső hatását (2). Jelenleg a polietilénglikolt (PEG) széles körben használják a kolonoszkópia előtti béltisztításra hatékonysága és széles körű elfogadhatósága miatt (3).

Amint tudjuk, a bél mikrobióta fontos az emberi egészség fenntartásában. Fiziológiás körülmények között a béltraktusban stabil arányban léteznek együtt szimbiózisban lévő fiziológiás anaerob baktériumok, szimbiózisban lévő kondicionális patogén baktériumok és egyéb káros baktériumok. Ha azonban a bélmikrobióta megváltozik, vagy a bélmikrobióta aránya kibillen az egyensúlyból, megfelelő patofiziológiai változások következnek be (4). A bélelőkészítő eljárás során nagy mennyiségű folyadék kerül a bélrendszerbe, és jelentősen megzavarja a normál bélüreg környezetét, a hashajtók szedése pedig fokozhatja a bélmozgást és a bélperisztaltikát, ami miatt a baktériumok nem tudnak megtapadni a bélnyálkahártyán (5). Ezenkívül a bélkészítmény által a bélkörnyezetbe bevitt nagy mennyiségű oxigén erősen csökkenti az anaerob baktériumok számát, és elősegíti az aerob baktériumok szaporodását, ami a bél mikrobiális rendellenességéhez vezet (6).

A probiotikumok “élő mikroorganizmusok, amelyek megfelelő adagok bevitele esetén jótékony hatással lehetnek a gazdaszervezetre” (7), korábbi vizsgálatok szerint a probiotikumok aktív szerepet játszanak számos emberi betegségben, beleértve az irritábilis bél szindrómát, a gyulladásos bélbetegséget és a vastagbélrákot (8, 9). Korábbi vizsgálataink azt mutatták, hogy a probiotikus készítményeknek fontos hatásuk van a gasztrosztómiát követő gyulladásos válasz csökkentésében és a posztoperatív betegek gyomor-bélrendszeri tüneteinek javításában (10), és a probiotikus készítmények jelentősen enyhítették a orrgarat karcinómában szenvedő betegek orrnyálkahártya sugárterápia által okozott szájnyálkahártya-gyulladását is (11). Bár figyelmet fordítottak a bélkészítmények mellékhatásaira, pl, a bélmikrobióta kiegyensúlyozatlanságára és a bélnyálkahártya károsodására tudományos körökben, kevés munkát végeztek a bélkészítmény mellékhatásainak probiotikus kiegészítéssel történő csökkentésére.

A jelen vizsgálatban a Bifidobacterium Tetragenous viable Bacteria tabletta klinikai probiotikus gyógyszerét használták a bélkészítményt kapó önkéntesekre gyakorolt hatásának értékelésére, és nagy áteresztőképességű szekvenálást alkalmaztak annak felmérésére, hogy a probiotikumok pozitív hatással vannak-e a bélkészítmény által okozott bélmikrobióta-zavarra.

Anyagok és módszerek

Etikai nyilatkozat

A jelen vizsgálatot a Nanchang Egyetem második kapcsolt kórházának (Nanchang, Kína) intézményi felülvizsgálati bizottsága hagyta jóvá. A betegek írásbeli tájékozott beleegyezésüket adták a mintavételhez. A projektet a Kínai Klinikai Kísérletek Regisztrációs Központja is regisztrálta és jóváhagyta (ChiCTR1900022539).

A vizsgálat felépítése és a betegek felvétele

A vizsgálatot a kínai Nanchang Egyetem második kapcsolt kórházában végezték 2018 decembere és 2019 novembere között. Harminckét alany (29 férfi, 3 nő), átlagéletkoruk 51 év (tartomány 30-70 év), magasságuk 1,66 m, testsúlyuk 61,78 kg, testtömegindexük (BMI) 22,39 volt. Öt résztvevőnek volt a kórtörténetében magas vérnyomás, négynek cukorbetegség, háromnak pedig magas vérnyomás és cukorbetegség. Az előírásoknak megfelelően a gyógyszeres kezelést nem függesztették fel a vizsgálat ideje alatt. Továbbá egyetlen résztvevő sem szedett antibiotikumot a téma során, és nem alakult ki fertőzés a közelmúltban, és nem szedtek más probiotikumokat és joghurtokat sem. Az önkéntesek egyike sem volt vegetáriánus (1. táblázat).

Kísérleti protokoll

A 32 önkéntest két csoportra osztották: placebocsoport (C csoport, n = 16) és probiotikus csoport (P csoport, n = 16). A probiotikum (Bifidobacterium Tetragenous életképes baktérium tabletta (SiLianKang), Hangzhou Grand Biologic Pharmaceutical Inc., Hangzhou, Kína. SFDA jóváhagyási szám: S20060010, amely >0,5 × 106 CFU/tabletta Bifidobacterium infantis, >0,5 × 106 CFU/tabletta Lactobacillus acidophilus, >0,5 × 106 CFU/tabletta Enterococcus faecalis és >0,5 × 105 CFU/tabletta Bacillus cereus). A résztvevőknek azt javasolták, hogy a bélkészítményt megelőző napon zabkását, tésztát és egyéb rostszegény étrendet fogyasszanak, a kolonoszkópia után pedig normális étrendet ettek. A kezelési folyamat alatt tilos volt az antibiotikumok, valamint az ivás és a savanyúság fogyasztása. Mindannyian a kolonoszkópia után kezdtek placebót vagy probiotikus készítményeket szedni 5-7 napig (három tabletta és naponta háromszor).

A résztvevők 2 L polietilénglikolt (PEG, SFDA engedélyszám: H20020031, amely az A csomagban 0,74 g kálium-kloridot és 1,68 g nátrium-bikarbonátot, a B csomagban 1,46 g nátrium-kloridot és 5.68 g nátrium-szulfát, C csomag: 60 g polietilén-glikol 4,000) 4-5 órával a kolonoszkópia előtt, és a PEG-et 1 órán belül teljesen be kell venni. 1 ml lidokain-hidroklorid injekcióval (SFDA engedélyszám: H37021309), 1 ml nalbufin-hidroklorid injekcióval (SFDA engedélyszám: H20130127) és 20 ml propofol emulziós injekcióval (SFDA engedélyszám: H20051843) végzett intravénás érzéstelenítést követően a résztvevők kolonoszkópiát végeztek. Ha a résztvevők a kolonoszkópia során intoleranciát mutattak, megfelelő érzéstelenítőket adtak hozzá. A székletet 3 időpontban (3 nappal a kolonoszkópia előtt, a bélkészítéssel egy napon közvetlenül a kolonoszkópia előtt és 7 nappal az eljárás után) gyűjtötték. Az összegyűjtött mintákat 50%-os glicerinben (Cat#56-81-5; Sengon Biotech, Kína) tároltuk, és a további felhasználásig azonnal -80°C-on tároltuk.

Teljes bakteriális genomiális DNS extrakció és nagy áteresztőképességű szekvenálás

Egyenként 96 székletmintát gyűjtöttünk, és a genomiális DNS-kittel (Tiangen Biotech Co., Ltd., Peking, Kína) kombinált bead blasting módszert használtuk a széklet mikrobiális DNS-ének extrakciójára (12). A tisztított DNS koncentrációját és tisztaságát 230 nm-en (A 230) és 260 nm-en (A 260) spektrofotométerrel határoztuk meg (NanoDrop; Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA). A 16S rDNS gén V4 régióját minden egyes mintában 515F/806R primerrel amplifikáltuk (515F, 5′-GCACCTAAYTGGGYDTAAAGNG-3′; 806R, 5′- TACNVVGGGTATCTAATCC-3′), és a PCR-termékeket IlluminaHiSeq 2000 platformon szekvenáltuk (GenBank hozzáférési szám: PRJNA597277) (13).

Adatelemzés

A nagy áteresztőképességű szekvenálási adatok elemzéséhez a Cutadapt (1.9.1 verzió, http://cutadapt.readthedocs.io/en/stable/), az UCHIME algoritmus http://www.drive5.com/usearch/manual/uchime_algo.html, az UPARSE szoftvercsomag (7. verzió.0.100), a QIIME szoftver (1.9.1 verzió), a QIIME szoftvercsomag (1.8.0 verzió) és a SIMCA-P szoftver (11. verzió).5; Umetrics; Sartorius Stedim Biotech, Malmö, Svédország) használtuk az α diverzitás (mintákon belül, a megfigyelt OTU-k indexei, Chao1, Shannon, Simpson, ACE és áruk lefedettsége) és a β diverzitás (minták között, PCA, PCoA és NMDS) meghatározására (14, 15).

Az adatokat átlag ± standard eltérés (SD) formában mutatjuk be. A statisztikai elemzéseket a Prism szoftver (7.0 verzió; GraphPad Software, San Diego, CA, USA) és az SPSS 17.0 szoftver (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) segítségével végeztük. A statisztikai szignifikanciát egyirányú varianciaanalízissel (ANOVA), majd Tukey többszörös összehasonlító teszttel és F-tesztekkel határoztuk meg. A P < 0,05 hibavalószínűséget statisztikailag szignifikánsnak tekintettük.

Eredmények

Páciensek alapjellemzői

2018 decembere és 2019 novembere között 32 önkéntest vettek fel a placebocsoportba (C csoport, 16 önkéntes) és a probiotikumcsoportba (P csoport, 16 önkéntes), akiknek nemét, életkorát, BMI-jét, alapjellemzőit, kórtörténetét és gyomor-bélrendszeri reakcióit a bélkészítmény előtt és után az 1. táblázatban foglaltuk össze. A C csoport és a P csoport között nem volt szignifikáns különbség.

A bélkészítmény hatása a bélmikrobákra

A bélkészítmény hatással lehet-e a bélmikroorganizmusokra, a baktériumok V4 hipervariábilis régióját 16S rDNS amplikon szekvenálási módszerrel 16 önkéntes székletéből amplifikálták 16 önkéntes székletéből a bélkészítmény előtt (CB csoport), alatt (CM csoport) és után (CA csoport).

Az 1A-C ábrákon a Shannon-index, a Simpson-index és a megfigyelt fajok azt jelezték, hogy a bélkészítmény előfordulása kismértékben befolyásolta a bél mikrobiális közösségének α-diverzitását a CB és a CM csoport, a CB és a CA csoport között, míg a CM és a CA csoport között jelentősen befolyásolta a mikrobiális diverzitást (P < 0,05). A főkoordináták elemzése (PCoA) pedig azt mutatta, hogy a CM-csoport és a CA-csoport mikrobiális diverzitása különbözött a CB-csoportéhoz képest (1D ábra). Emellett a Venn-index (1E ábra) eredményei azt mutatták, hogy a CB, CM és CA csoportokban 2 068, 3 426 és 1 695 OTU volt, és a közös OTU-k aránya 27,71% (573/2 068), 16,73% (573/3 426) és 33,81% (573/1 695) volt.

Továbbá tovább elemeztük a domináns baktériumokat törzs szinten (2A-E ábrák), és azt találtuk, hogy a Proteobacteria, Bacteroidetes, Firmicutes és Actinobacteria voltak a domináns törzsek ebben a 3 csoportban. Az eredmények azt mutatták, hogy a bélpreparátum növelte a Proteobacteria relatív abundanciáját (0,266 vs. 0,410), míg csökkentette az Actinobacteria relatív abundanciáját (0,044 vs. 0,029), és kismértékben befolyásolta a Firmicutes (0,462 vs. 0,408) és a Bacteroidetes (0,194 vs. 0,136) relatív abundanciáját a CB csoporthoz képest. Hét nappal a bélkészítmény elkészítése után a Proteobacteria relatív abundanciája 0,410-ről 0,335-re csökkent. Furcsa módon az Actinobacteria relatív abundanciája 0,029-ről 0,119-re nőtt, míg a Firmicutes (0,409 vs. 0,389) és a Bacteroidetes (0,136 vs. 0,126) relatív abundanciája továbbra is csökkenő tendenciát mutatott a CM csoporthoz képest. Genusszinten (2F-J. ábra) a bélkészítmény során megfigyelhető volt, hogy a Bacteroides és az Acinetobacter relatív abundanciája domináns baktérium volt, az Acinetobacter relatív abundanciája (0,042 vs. 0,176) jelentősen megnövekedett, a Streptococcus (0,020 vs. 0,008), a Bifidobacterium (0,036 vs. 0,022) és a Faecalibacterium (0,075 vs. 0,065) relatív abundanciája pedig enyhén megváltozott a CB csoporthoz képest. Hét nappal a bélkészítmény elkészítése után azonban szignifikánsan nőtt a Streptococcus (0,007 vs. 0,068) és a Bifidobacterium (0,022 vs. 0,068) aránya.109), valamint a Faecalibacterium (0,065 vs. 0,031) és az Acinetobacter (0,176 vs. 0,136) relatív gyakoriságának csökkenése a CM-csoporthoz képest.

A probiotikus készítmény hatása a bél mikrobiális egyensúlyára

A probiotikumok bélkészítményt kapó önkéntesek bélmikrobiótájára gyakorolt hatásának értékeléséhez 7 napon keresztül bélkészítmény előtt (PB csoport), közben (PM csoport) és után (PA csoport) gyűjtöttek székletet (5-7 napig szedtek probiotikus készítményt).

Megfigyeltük, hogy a bélkészítmény jelentősen befolyásolta a mikrobiális közösség α-diverzitását a Shannon-index (3A ábra) és a Simpson-index (3B ábra, P < 0,05) alapján a PB és a PM csoport között. Érdekes módon a megfigyelt fajok egyértelmű növekedést kaptak a bélpreparátum után, de 7 nappal a kezelés után nyilvánvaló csökkenést (3C ábra). Továbbá a PCoA eredmények azt mutatták, hogy a probiotikumok szedése nagymértékben helyreállította a megzavart mikrobiótát a normál szintre a PM csoportban és a PA csoportban (3D ábra), és a közös OTU-k az összes OTU 28,68%-át (508/1 771), 23,67%-át (508/2 146) és 36,92%-át (508/1 376) foglalták el a PB, PM és PA csoportokban.

Ezután tovább vizsgáltuk a probiotikus beavatkozás hatását a mikrobiális összetételre, és megállapítottuk, hogy a probiotikumok kiegészítése jelentősen csökkentette a Proteobaktériumok (0.515 vs. 0,173) és erőteljesen megnövelte a Bacteroides relatív abundanciáját (0,166 vs. 0,338) a PM csoportban a PA csoporthoz képest törzs szinten (P < 0,05). A nemzetség szintjén a kiegészített probiotikumok nyilvánvalóan csökkentették az Acinetobacter arányát (0,204 vs. 0,071) a PM csoportban a PA csoporthoz képest, és jelentősen növelték a Bifidobacterium arányát (0.017 vs. 0,110), Bacteroides (0,095 vs. 0,155) és Faecalibacterium (0,028 vs. 0,060) a PM csoportban a PA csoporthoz képest (4F-J. ábra).

A mikrobiális változások a CA csoport és a PA csoport között

A probiotikumok bélpreparációra gyakorolt hatásának jobb megértése érdekében összehasonlítottuk a mikrobiális diverzitást a CA és PA csoportba tartozó önkéntesek között. Amint az 5A-C ábrákon látható, a probiotikumok pótlása jelentősen növelte a Shannon-indexet és a Simpson-indexet (P < 0,05), miközben csökkent a megfigyelt fajok száma. A PCoA eredmények azt mutatták, hogy a CA csoport és a PA csoport mintái egymástól messze szóródtak (5D ábra). A CA csoportban és a PA csoportban 1695 és 1376 OTU volt, és a közös OTU szám 570 volt (5E ábra). Ezenkívül a Lefse-elemzés azt mutatta, hogy a Bacteroidia (osztályban), Bacteroidetes (törzsben), Bacteroidaceae (családban), Bacteroides (nemzetségben), Fusobacteriaceae (családban), Porphyromonadaceae (családban) és Parabacteroides (nemzetségben) jelentősen magasabb volt a PA csoportban, mint a CA csoportban (5F ábra).

Ezután összehasonlítottuk a CA csoport és a PA csoport specifikus baktériumait. A probiotikumok kiegészítése jelentősen gazdagította a Bacteroidetes (0,126 vs. 0,338), míg a Proteobacteria (0,335 vs. 0,173) és Firmicutes (0,389 vs. 0,330) százalékos arányát a PA csoporthoz képest törzsszinten csökkentette (P < 0,05). A nemzetségek szintjén (6E-K. ábra) a probiotikumok kiegészítése csökkentette az Acinetobacter (0,136 vs. 0,071) és a Streptococcus (0,068 vs. 0,023) relatív abundanciáját, míg növelte a Bacteroides (0.068 vs. 0,155), Roseburia (0,02 vs. 0,04), Faecalibacterium (0,031 vs. 0,060) és Parabacteroides (0,16 vs. 1,92%).

Diszkusszió

A béltisztítás szükséges a kolonoszkópia során, és a hosszú ideig tartó biztonságos alkalmazása miatt az emberek figyelmen kívül hagyják a bél mikroorganizmusokra gyakorolt negatív hatását (16). Mint tudjuk, a vastagbél mikroorganizmusai az emlősök normális élettani funkcióinak elősegítésének alapját képezik, beleértve az angiogenezist, az anyagcserét, az emésztést és az immunrendszer fejlődését (17). Mi több, különböző betegségek, köztük az elhízás, a 2-es típusú cukorbetegség, a vastagbélrák és a gyulladásos bélbetegségek akkor lépnek fel, ha a bélmikrobióta nincs egyensúlyban (8, 9, 18).

A normális bél mikroökoszisztéma fő összetevői az obligát anaerobok (Bacteroidetes és Firmicutes), és a fakultatív anaerobok (például Proteobacteria) általában csak kis arányt képviselnek, és a bél mikrobióta egyensúlyhiányát gyakran a fakultatív anaerobok növekvő száma okozza (19). A bélkészítmény nagy mennyiségű oxigént juttathat a bélüregbe, károsíthatja a bélüreg anaerob környezetét, és jó növekedési környezetet biztosíthat a fakultatív anaerob vagy aerob baktériumok számára. Korábbi vizsgálatok és a jelen munka is azt mutatta, hogy a bélkészítmény nagymértékben növelte a Proteobacteria bőségét .

Ebben a vizsgálatban azt találtuk, hogy a bélkészítmény jelentősen csökkentette a Bacteroidetes és Firmicutes törzseket (2. ábra), és a probiotikumok szedése kevés hatással volt a Firmicutes törzsre, míg a Bacteroidetes bőségét jelentősen növelte (4. ábra). Korábbi vizsgálatok kimutatták, hogy a Firmicutes bőségének növekedése és a Bacteroidetes bőségének csökkenése szorosan összefüggött az egészségtelen körülményekkel. Ezért a Firmicutes/Bacteroidetes növekedése potenciális kockázatot jelenthet a betegek egészségére (20-22). Jelen vizsgálatban azt találtuk, hogy a Firmicutes/ Bacteroidetes aránya a CA csoportban (3,08) magasabb volt, mint a PA csoportban (0,98), ami arra utal, hogy a probiotikumok szedése csökkentheti a potenciális betegségkockázatokat a bélkészítmény által. Ezenkívül az emberi szervezet általában nem képes lebontani a legtöbb komplex poliszacharidot (a napi étrendünk fő összetevőjét és fő tápanyagforrását), amíg el nem éri a vastagbelet, és a Bacteroidetesek létfontosságú szerepet játszanak a cellulóz, pektin és xilán komplex poliszacharidok lebontásában, ami segíthet az embereknek több energiát felszívni az étrendből (23). Ezenkívül a Bacteroidetes által termelt butirát fontos szerepet játszik a gazdaszervezet bélrendszeri egészségének fenntartásában, immunitást és tumorellenes hatást fejt ki (24).

Nemzedéki szinten a probiotikumok pótlása jelentősen csökkentette az Acinetobacter bőségét, amely a természetben gyakori aerob és gram-negatív baktérium, amely egy létfontosságú kórokozóhoz tartozik, amely különösen az alacsony immunfunkciójú betegeknél kórházi fertőzést okoz (Acinetobacter baumannii) (25). Az Acinetobacter a dél-koreai kórházak intenzív osztályán a harmadik leggyakoribb humán patogénként szerepelt, és a különböző antibiotikumokkal szembeni eredendő gyógyszerrezisztenciája miatt a különböző antibakteriális gyógyszerekkel szembeni gyógyszerrezisztencia meghatározó tényezői közé került (26). Ezenkívül a bélkészítmény jelentősen csökkentette a Bacteroides szintjét, és a probiotikumok nyilvánvalóan visszaszerezték a bőségét. Vizsgálatok kimutatták, hogy a Bacteroides képes csökkenteni a bél oxigénszintjét, hogy elősegítse a szigorú anaerobok növekedését (23), és a Bifidobacterium egyes törzseit probiotikumként alkalmazták az élelmiszerekben és a gyógyászatban (10, 27). A Bacteroides és a Bifidobacterium stabil és hosszú távú kapcsolatot létesíthet a gazdaszervezettel, és jótékonyan hat az emberi szervezet egészségére, képes az élelmi rostokat rövidláncú zsírsavakká (SCFA) lebontani, ami energiaforrást biztosít a sejtek számára, elősegíti a barrierfunkciót és csökkenti a gyulladásos reakciók előfordulását (28, 29).

Végeredményben összehasonlítottuk a CA és a PA mikrobiális diverzitását, és megállapítottuk, hogy a probiotikumok szedése túlnyomórészt növelte a jótékony baktériumok, például a Roseburia bőségét (elsősorban vagy kizárólag butirátot termel, ami csökkentheti a gyulladás szintjét az egészben, különösen a vérben, tovább csökkenti az ateroszklerózis mértékét. Szív- és érrendszeri betegségekben szenvedő embereknél alacsonyabb szinten marad) (30, 31), Faecalibacterium (szimbiózisban élő baktérium, amely széles körben megtalálható az állatok és az emberek gyomor-bélrendszerében. Crohn-betegekben jelentősen csökkent, és probiotikumként felhasználható a Crohn-betegség kezelésére) (32-34) és Parabacteroides (képes ellenállni a bélgyulladásnak, fő metabolikus végtermékei a hasznos ecetsav és a borostyánkősav, amelyek a vastagbélgyulladásban szenvedő betegek bélrendszerében a normál tartománynál alacsonyabbak) (35-37) nemzetség szinten. Mindazonáltal a káros baktériumok, például a Streptococcus baktériumok száma feltűnően csökkent (5., 6. ábra). A Streptococcus gyakori opportunista kórokozó, beleértve a Streptococcus pyogenes-t, a Streptococcus viridans-t és a Streptococcus pneumoniae-t, amelyek gennyes gyulladást, endocarditist és szeptikémiát okozhatnak, tovább veszélyeztetve az emberi egészséget és életet (38, 39). Haenni és munkatársai jelezték, hogy a tetraciklin, makrolid és lincosamid antibiotikumok széles körű használata miatt a globális állattenyésztésben megjelent a Streptococcus zooepidermidis antibiotikum-rezisztenciája, ami a kezelés kudarcához vezet (40, 41).

A jelen vizsgálatban azt találtuk, hogy az orális probiotikumok valóban enyhítették a bélkészítmény által okozott bélmikrobiális zavart, nagymértékben csökkentették a Proteobacteria (törzs szinten), Acinetobacter (nemzetség szinten) kórokozókat, Streptococcus (nemzetség szinten), és fokozta a Bacteroidetes (törzs szinten), Bacteroides (nemzetség szinten), Roseburia (nemzetség szinten), Faecalibacterium (nemzetség szinten) és Parabacteroides (nemzetség szinten) probiotikumokat. Ezért okunk van feltételezni, hogy a probiotikus készítmények kiegészítése felgyorsítja a béltisztítás után a bél mikrobiális egyensúlyának kialakulását, elnyomja a káros baktériumok szaporodását és előnyös a bélrendszer egészségének megőrzése szempontjából.

Adatok elérhetőségi nyilatkozata

A tanulmányhoz létrehozott adatkészletek megtalálhatók az NCBI-ban: GenBank accession number PRJNA597277.

Etikai nyilatkozat

A humán résztvevőkkel végzett vizsgálatokat a Nanchang Egyetem második kapcsolt kórházának (Nanchang, Kína) intézményi felülvizsgálati bizottságai vizsgálták és hagyták jóvá. A projektet a Kínai Klinikai Kísérletek Regisztrációs Központja is regisztrálta és jóváhagyta (ChiCTR1900022539). A betegek/résztvevők írásbeli beleegyezésüket adták a vizsgálatban való részvételhez.

A szerzők hozzájárulása

TC és XD tervezték a kísérleteket, elemezték az adatokat és írták a kéziratot. CZ, HT, RY, ZL, YH és KW végezték a kísérleteket. Minden szerző megvitatta az eredményeket és véleményezte a végleges kéziratot.

Finanszírozás

Ezt a munkát a Kínai Nemzeti Természettudományi Alapítvány (Grant No. 81960103 XD-nek), a Jiangxi tartomány Természettudományi Alapítványa (Grant No. 20192ACBL20034 ZL-nek), a Jiangxi Tudományos és Technológiai Projekt (Grant No. 20181BBG70028, 20181BCB24003 és 20194BCJ22032 TC-nek), valamint Jiangxi tartomány dupla 10 ezres terve TC-nek (innovációs és technológiai szakemberek, mint csúcstehetségek).

érdekellentét

A szerzők kijelentik, hogy a kutatást olyan kereskedelmi vagy pénzügyi kapcsolatok hiányában végezték, amelyek potenciális összeférhetetlenségként értelmezhetők.