Protocollo di colorazione Verhoeff-Van Gieson (VVG) delle fibre elastiche
NovaUltra Special Stain Kits
Descrizione: Questo metodo è usato per identificare le fibre elastiche in tessuti come la pelle, l’aorta, ecc. su sezioni fissate in formalina e in paraffina e può essere usato anche per sezioni congelate. Le fibre elastiche saranno colorate di blu-nero e lo sfondo sarà colorato di giallo.
Fissazione: formalina al 10%.
Sezione: sezioni in paraffina a 5 um.
Soluzioni e reagenti:
Ematossilina alcolica al 5%:
Ematossilina ———————————- 5 g
Alcool 100% ———————————- 100 ml
Mescolare per sciogliere con l’aiuto di calore leggero. Filtrare.
Cloruro ferrico acquoso al 10% (preparare fresco, non necessario):
Cloruro ferrico ——————————– 10 g
Acqua distillata ——————————– 100 ml
Soluzione di iodio di Weigert:
Iodio di potassio —————————— 2 g
Iodio ——————————————- 1 g
Acqua distillata ——————————— 100 ml
Usa 4 ml di acqua distillata per sciogliere lo ioduro di potassio. Poi aggiungere lo iodio. Una volta che lo iodio è dissolto, diluire questa soluzione aggiungendo 96 ml di acqua distillata. Questa soluzione può essere preparata fresca come necessario o fatta in grandi quantità e conservata in bottiglia marrone al buio a temperatura ambiente.
Soluzione di lavoro di Verhoeff:
La soluzione di lavoro deve essere preparata fresca per ottenere i migliori risultati. Non macchia in modo soddisfacente se viene conservata più di un giorno lavorativo. Preparare la soluzione di lavoro aggiungendo nell’ordine i seguenti reagenti:
5% ematossilina alcolica ——————– 20 ml
10% cloruro ferrico —————————- 8 ml
Soluzione di iodio di Weigert ——————- 8 ml
Mescolare bene le quantità di cui sopra (o le proporzioni necessarie). La soluzione dovrebbe essere nera come un getto. Usare immediatamente e gettare dopo l’uso.
2% cloruro ferrico acquoso (preparare fresco, non necessario):
10% cloruro ferrico da sopra ———— 10 ml
Acqua distillata ——————————- 50 ml
5% tiosolfato di sodio acquoso:
Contromacchia di Van Gieson:
fucsina acquosa all’1% ——————— 5 ml
acido picrico acquoso saturo ————– 100 ml
Per i tessuti nervosi può essere preparato come segue:
1% di fucsina acquosa ——————- 15 ml
Acido picrico acquoso saturo ————- 50 ml
Acqua distillata ——————————- 50 ml
Procedura:
1. Deparaffinizzare e idratare i vetrini in acqua distillata.
2. Colorare in soluzione di Verhoeff per 1 ora. Il tessuto deve essere completamente nero.
3. Sciacquare in acqua di rubinetto con 2-3 cambi.
4. Differenziare in cloruro ferrico al 2% per 1-2 minuti.
5. Fermare la differenziazione con diversi cambi di acqua di rubinetto e controllare al microscopio la colorazione nera delle fibre elastiche e lo sfondo grigio. È meglio sotto differenziare leggermente il tessuto, poiché la successiva controcolorazione di Van Gieson può estrarre un po’ la macchia elastica.
6. Lavare i vetrini in acqua di rubinetto.
7. Trattare con tiosolfato di sodio al 5% per 1 minuto. Scartare la soluzione.
8. Lavare in acqua di rubinetto corrente per 5 minuti.
9. Contrastare in soluzione di Van Gieson per 3-5 minuti.
10. Disidratare rapidamente in alcool 95%, 2 cambi di alcool 100%.
11. Cancellare in 2 cambi di xilene per 3 minuti ciascuno.
12. Coprimacchia con mezzo di montaggio resinoso.