はじめに
微生物にはおよそ1万種の名前がつけられています。 また、同定された種1つに対して、未同定の種がさらに1万から10万あると推定されています。 細菌の種類が多いだけでなく、個々の細菌の数も多い。 スプーン1杯の土には、1億個の細菌が存在する可能性があります。 歯茎を削ると、1cm2あたり100万個の細菌が見つかる（1cm2は小指の爪の大きさ）。 4310>
現在知られているほとんどの細菌種は、グラム染色反応、形態学、代謝反応などの伝統的な微生物学的手法によって同定されています。 細菌は単独で生活することはほとんどなく、他の細菌と共同して生活している。 このことは、環境においても、私たちの体の中や上においても同じです。 この授業では、病気におけるバクテリアの役割に焦点を当てます。
細菌を物理的に分離するための最初の条件は、実験室で培養できることです。 そのためには、増殖に最適な温度、最適な酸素要求量、最適な栄養要求量に関する知識が必要です。 このコースでは、非常に限られた数の細菌を扱います。 また、扱う細菌は、実験室で培養するのが非常に簡単です。
生物の分離には主に2つの方法があります。
- Streaking for isolation on an agar plate
- The pour plate method
Streaking for isolation on an agar plateには、単一細胞が認識できる個々のコロニーにつながるよう空間的に分離できるような低密度まで細胞を連続して希釈することが必要である。 プレート法では、試料を十分に希釈してから溶融冷却した寒天に加え、この混合物をディッシュに流し込む。 分離された細胞は、寒天の中で成長する個々のコロニーを生じます。 この方法は、少し厄介なことがある。 溶かした寒天が熱すぎると、すべての細菌が死んでしまう。 溶かした寒天が冷たすぎると、シャーレの中に大きな塊が出来てしまう。 ストリーキング法では、寒天の表面に個々のコロニーを得ることができる。
概要
あなたは3つの生物、Staphylococcus xylosus、Serratia marsescens、Escherichia.coliを含むブロス試料を与えられるでしょう。 しかし、S. marsescensは35℃以下、最適には室温（25℃）でしか赤色色素を形成しない。
E. coliは、すべての温度で褐色の外観を持ち、また成長が速く、大きなコロニーを形成します。
S. xylosusは、すべての温度で黄色-オレンジの外観を持ち、成長が速く、中-大型のコロニーを形成します。 あなたのプレートは、室温で48時間培養されます。
材料
- Staphylococcus xylosus, Serratia marsescens, Escherichia.を含むトリプティックソイブロス（TSB）チューブの混合培養液1個。 coli (all BSL2)
- 3 TSA plate
Streaking for Isolation Procedure
Streaking for Isolationにはいくつかの方法がある。
- 自分のプレートに名前、日付、セクション、生物をラベルしてください。
- BSL2の手順で、tryptic soy broth (TSB) tubeからループ一杯の生物を採取してください。 無菌法プロトコルを参照してください。
- ブロスチューブを十分に混合し、菌がブロスに均一に懸濁していることを確認してください。
- TSBチューブを回収してください。
- 次の部分は、実験台にプレートを置いても手に持っても行うことができます。 どちらで行うか決めてください。 寒天の表面をループで軽く前後にドラッグします。 (図1参照）
- ドラッグすればするほど、より多くの細菌が付着します。
- 一般的なアイデアは、スワイプするたびに細菌の濃度を下げることです。
- 焼却炉を使用している場合は、ループを滅菌してください。 プラスチックループを使用している場合は、使用済みのループをキャビサイド容器に捨て、新しい滅菌プラスチックループを入手します。
- 元のブロスチューブには戻さないでください。
- o プレートの中央にドラッグしないでください。
- o 寒天の表面にストリークの線のくぼみがかすかに見えるはずです。
- 滅菌ループを使って、2番目のストリークで手順を繰り返します。
- 滅菌ループを使って3番目のストリークで手順を繰り返し行います。
- 滅菌ループを使い、3本目のストリークを繰り返します。最後の部分をプレートの中心に向かってジグザグに動かします。
- 完成したプレートを寒天質を上にして、インキュベートセクションのフロントデスクにあるインキュベーションラックに置きます。
図1．
Note
- ストリーキングを行う際には、焼却炉を使用するか、新しい滅菌プラスチックループを入手して、ループを滅菌することが絶対に必要です。 これは学生が犯す最も一般的なミスです。
- あまり長い間プレートを開いたままにしないでください。 これは難しい手順です。