Verhoeff-Van Gieson (VVG) Staining Protocol for Elastic Fibers
NovaUltra Special Stain Kits
Beschrijving: Deze methode wordt gebruikt voor het identificeren van elastische vezels in weefsels zoals huid, aorta, enz. op formaline-vaste, paraffine-ingebedde secties, en kan ook worden gebruikt voor bevroren secties. De elastische vezels worden blauwzwart gekleurd en de achtergrond geel.
Fixatie: 10% formaline.
Sectie: paraffinedoorsneden op 5 um.
Oplossingen en reagentia:
5% alcoholische hematoxyline:
Hematoxyline ———————————- 5 g
100% alcohol ———————————- 100 ml
Meng om op te lossen met behulp van zachte warmte. Filtreer.
10% waterig ijzerchloride (vers bereiden, niet nodig):
ijzer(III)chloride ——————————– 10 g
gedestilleerd water ——————————– 100 ml
Weigert’s jodiumoplossing:
Kaliumjodide —————————— 2 g
Jodium ——————————————- 1 g
Gedestilleerd water ——————————— 100 ml
Gebruik 4 ml gedestilleerd water om het kaliumjodide op te lossen. En voeg dan jodium toe. Zodra het jodium is opgelost, verdunt u deze oplossing door er 96 ml gedestilleerd water aan toe te voegen. Deze oplossing kan naar behoefte vers worden bereid of in grotere hoeveelheden worden gemaakt en in een bruine fles in het donker bij kamertemperatuur worden bewaard.
Verhoeff’s Werkoplossing:
De werkkleuroplossing moet vers worden aangemaakt voor de beste resultaten. Als de oplossing langer dan een werkdag wordt bewaard, wordt de kleuring niet bevredigend. Bereid de werkoplossing door in volgorde de volgende reagentia toe te voegen:
5% alcoholische hematoxyline ——————– 20 ml
10% ijzer(III)chloride —————————- 8 ml
Weigert’s jodiumoplossing ——————- 8 ml
Meng de bovenstaande hoeveelheden (of de benodigde verhoudingen daarvan) goed. De oplossing moet gitzwart zijn. Onmiddellijk gebruiken en na gebruik weggooien.
2% waterig ijzer(III)chloride (vers bereiden, niet nodig):
10% ijzer(III)chloride van boven ———— 10 ml
Gedestilleerd water ——————————- 50 ml
5% waterig natriumthiosulfaat:
Van Gieson’s tegenkleuring:
1% waterig zuur fuchsine ——————— 5 ml
verzadigd waterig picrinezuur ————– 100 ml
Voor zenuwweefsels kan als volgt worden bereid:
1% waterig zuur fuchsine ——————- 15 ml
Verzadigd waterig picrinezuur ————- 50 ml
Gedestilleerd water ——————————- 50 ml
Procedure:
1. Deparaffineer en hydrateer de objectglaasjes met gedestilleerd water.
2. Kleur gedurende 1 uur in de oplossing van Verhoeff. Het weefsel moet volledig zwart zijn.
3. Spoel in kraanwater met 2-3 verversingen.
4. Differentieer in 2% ijzer(III)chloride gedurende 1-2 minuten.
5. Stop het differentiëren met enkele malen verversen van kraanwater en controleer microscopisch op zwarte elastische vezelverkleuring en grijze achtergrond. Het is beter het weefsel iets te weinig te differentiëren, aangezien de daaropvolgende tegenkleuring met Van Gieson de elastische vlek enigszins kan extraheren.
6. Was de objectglaasjes in kraanwater.
7. Behandel gedurende 1 minuut met 5% natriumthiosulfaat. Gooi de oplossing weg.
8. 5 minuten wassen in stromend kraanwater.
9. Tegenkleuren in Van Giesons oplossing gedurende 3-5 minuten.
10. Snel dehydrateren in 95% alcohol, 2 maal 100% alcohol.
11. Klaren in 2 xyleenverversingen gedurende telkens 3 minuten.
12. Afdekken met harsachtig inbedmiddel.