DRD4 Polimorfismos Genéticos como Fator de Risco para Crianças com Déficit de Atenção e Hiperactividade na População Iraniana

Abstract

Contexto e Objetivo. Sabe-se que a disfunção da dopamina está associada ao Transtorno de Hiperactividade com Déficit de Atenção (DDAH). O gene receptor da dopamina D4 (DRD4) é um dos genes importantes nesta via. Este estudo pretendeu investigar o número variável de repetições em tandem (VNTR) no exon 3 do gene DRD4 em crianças e adolescentes iranianos. Materiais e Métodos. Neste estudo, 130 crianças com TDAH, entre 6-14 anos de idade, e 130 crianças saudáveis, dentro da mesma faixa etária, foram matriculadas. Todas as crianças foram selecionadas do noroeste do Irã que têm origem étnica caucasiana e são de um grupo étnico túrquico. Os polimorfismos VNTR do gene DRD4 foram avaliados por PCR usando primers específicos exon 3 seguidos por eletroforese em gel de agarose. Descobertas. O princípio de Hardy-Weinberg e o teste qui-quadrado mostraram uma diferença significativa nos alelos de 4 repetições (4R) entre os grupos ADHD (76,2%) e controlo (53,8%) (; ; ). A menor porcentagem de alelos de repetição em ambos os grupos foi de 2R. Conclusão. Existe uma correlação significativa entre os alelos 4R do DRD4 e do TDAH no noroeste do Irã.

1. Introdução

ADHD é um distúrbio psiquiátrico infantil comum que está associado aos sintomas de hiperatividade sustentada, impulsividade e desatenção. A prevalência mundial é de 4-8% em crianças em idade escolar, que pode persistir durante a adolescência e a vida adulta em 50-80% dos casos. Uma prevalência comparável é relatada pela população iraniana e a taxa é estimada em 9,7% em crianças que vivem na cidade de Tabriz .

ADHD é um distúrbio neurocomportamental heterogêneo com etiologia multifatorial, levando a alternâncias de vias neurais . O fenótipo é bastante amplo e inclui a deficiência do funcionamento social e aquisição de habilidades e diminuição das habilidades cognitivas. Estes aumentam a carga de TDAH não diagnosticado e não tratado com um impacto significativo na carreira, vida e realizações acadêmicas .

Diagnosticar TDAH é atualmente baseado em similaridades clínicas, como outras condições psiquiátricas. Os diversos fenótipos resultam em desafios diagnósticos que devem ser abordados através da melhoria dos métodos diagnósticos. Em relação a esta abordagem, estudos farmacológicos, modelos animais e imagens do cérebro mostram o envolvimento das vias de catecolaminas, incluindo neurotransmissores e genes relacionados. A dopamina e a norepinefrina estão envolvidas nas funções neurológicas, assim como a atenção e a consciência . Por outro lado, as vias da dopamina estão envolvidas no controlo motor e no controlo da libertação de várias hormonas. Estas vias e grupos celulares formam um sistema de dopamina que é neuromodulador. As funções motoras da dopamina estão ligadas a uma via separada, com corpos celulares na substantia nigra que fabricam e libertam dopamina no striatum dorsal. O gene DRD4 que é expresso em várias áreas do cérebro também foi investigado em relação ao ADHD . O mapeamento da ligação mostra o locus deste gene receptor no cromossoma 11p15.5 . Este gene tem vários polimorfismos na sua sequência nucleotídica. A variável número tandem de 48 pares de bases (VNTR) no exon III do polimorfismo DRD4 é o polimorfismo mais estudado em associação com o ADHD. Estudos moleculares biológicos mostram que esta região se associa à proteína G, modulando a produção de cAMP .

O comprimento do exon III varia entre 2 e 11 repetições de um VNTR similar de 48-bp, apresentado por D4.2 a D4.11 . Normalmente, estes alelos de repetição têm duas categorias: alelo de comprimento de repetição curta (2-4 repetições) e alelo de comprimento de repetição longa (5-8 repetições) . A metanálise mostra que as variantes 2, 4 e 7 são muito mais comuns .

Existem evidências que suportam uma relação significativa entre os alelos de 7 repetições do polimorfismo DRD4 exon III e ADHD . Por outro lado, outro grupo de estudos relatou uma fraca correlação entre DRD4 e TDAH . No entanto, não é bem conhecido se estes resultados negativos se devem à diferença entre grupos e populações com diferentes raças, genética e heterogeneidade, fraqueza na realização e interpretação de testes estatísticos, ou uma diferença real entre diferentes sociedades. Como resultado, este estudo visou investigar a relação do polimorfismo DRD4 com TDAH na população iraniana.

2. Materiais e Métodos

O presente estudo foi realizado em uma clínica de psiquiatria infantil e adolescente da Universidade de Ciências Médicas de Tabriz. O procedimento foi aprovado pelo comitê de ética regional e o consentimento informado por escrito foi obtido dos pais das crianças e adolescentes participantes.

3 Critérios de inclusão e exclusão

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Os critérios de inclusão foram crianças e adolescentes, de 6-18 anos de idade, diagnosticados com TDAH, com base em entrevistas clínicas realizadas por um psiquiatra de crianças e adolescentes.

Os critérios de exclusão foram distúrbio psiquiátrico concomitante, epilepsia, condição médica grave ou histórico de trauma grave, e qualquer grau de incapacidade intelectual. Foram excluídos casos de TDAH com DDA comorbida e/ou DC.

4. Participantes

Este estudo foi realizado no noroeste do Irã. As populações que vivem nestas áreas têm origem étnica caucasiana e são de um grupo étnico túrquico. As crianças diagnosticadas com TDAH () em clínica psiquiátrica especializada foram incluídas por um psiquiatra infantil e adolescente. Neste estudo, o diagnóstico de TDAH foi realizado através de uma entrevista diagnóstica semi-estruturada baseada nos critérios DSM-IV-IR.

Um grupo de crianças (), que foram introduzidas para procedimento de adenotonsillectomia, dentro da mesma faixa etária, foram tomadas como controles. Estas crianças foram diagnosticadas como não tendo nenhuma condição psiquiátrica pelo mesmo procedimento diagnóstico que as crianças com TDAH. Um consentimento informado por escrito foi obtido de todos os pais.

5. Instrumentos

5.1. Kiddie Schedule for Affective Disorders and Schizophrenia-Present and Lifetime Version (K-SADS-PL)

Esta é uma entrevista diagnóstica semi-estruturada, desenhada com base nos critérios definidos pelo Diagnostic and Statistical Manual for Mental Disorders, 4th edition (DSM-IV). Esta ferramenta foi utilizada para identificar TDAH e possíveis condições psiquiátricas comorbitárias, bem como para a escolha dos controles .

O procedimento diagnóstico foi completado através de entrevista com a criança e os pais. O teste-reteste e a confiabilidade entre os médicos da versão persa é relatada como 0,81 e 0,69 .

5,2. PCR-Variable Number of Tandem Repeats

No seu processo, foram preparadas 2 mL de amostras de sangue periférico e extraído o ADN genómico, utilizando o kit de ADN QIAamp, de acordo com as instruções do fabricante. O ADN extraído foi verificado com um dispositivo NanoDrop dentro da gama de 260-280 nm. A genotipagem do DRD4 exon III foi realizada por reacção em cadeia da polimerase com as seguintes sequências de primer: (Avançar) 5′-GGTCTGCGGTGGAGTCTG-3′ (Reverso) 5′-GCGGACTACGTGGTCTACT-3′

Amplificação por PCR foi realizada em 20 μL mistura de reacção contendo 50 ng de ADN genómico, usando Ampliqon Master Mix (Dinamarca), 1 mL de cada primer, e 0.2 μLTaq DNA polimerase, de acordo com o plano de temperatura da tabela 1. Foram observados produtos PCR em gel de ágar (2%) corados com fluorescência de brometo de etídeo sob luz ultravioleta. Os produtos de digestão foram analisados após electroforese em gel de agarose.

6. Análise estatística

Dados da contagem dos produtos gênicos em cada amostra foram fornecidos ao SPSS21. Os dados são expressos em número e porcentagem, e os valores médios obtidos são investigados, utilizando o teste do qui-quadrado. Neste estudo, foi considerado significativo.

7. Resultados

Cento e trinta crianças com diagnóstico de TDA/H e 130 crianças sem diagnóstico psiquiátrico foram inscritas. A idade média das crianças dos dois grupos não foi significativamente diferente. No entanto, havia mais homens no grupo TDAH (83% no grupo TDAH versus 61% no grupo controle). O papel de uma relação familiar de primeiro grau esteve presente em muitas amostras. Os descendentes de um primo casado representavam a maioria dos filhos com TDAH (Tabela 2). Como os resultados mostram, os pais dos filhos com TDAH tinham uma proporção significativamente maior de parentes de primeiro grau. Talvez a sua causa seja o facto de existir um padrão diferente do padrão multifactorial para esta doença. O estudo dos pedigrees mostra um padrão de herança de um gene; é por isso que a frequência de crianças com casamento consanguíneo (especialmente os primos de primeiro grau) foi maior que a do grupo de controle.

Tabela 3 mostra a frequência do VNTR DRD4 nos grupos ADHD e controle. O princípio de Hardy-Weinberg e o teste qui-quadrado mostraram uma diferença significativa em alelos 4R entre os grupos TDAH (76,2%) e controle (53,8%) (; ; ). Não houve diferença significativa entre os grupos em outras repetições. O genótipo 2R teve a menor prevalência.

8. Discussão

ADHD é um distúrbio neurocomportamental prevalente que começa durante a infância. De acordo com vários estudos de meta-análise, genes envolvidos na via dopaminérgica, especificamente DRD4, têm um papel importante na patogênese do TDAH . Não há estudo disponível sobre a relação deste tópico na população iraniana e este estudo foi realizado para utilizar repetições deste gene como um biomarcador para facilitar o diagnóstico deste distúrbio em crianças.

Neste estudo, o gene DRD4 foi observado em todos os participantes iranianos (ADHD e controles) dentro da faixa de 2R a 7R alelos. Os alelos dominantes em nosso estudo foram 4R, 5R e 6R, entre os quais o alelo 4R teve a maior prevalência. A diferença entre os grupos foi significativa apenas no alelo 4R. Os resultados do presente estudo são consistentes com os de Bidwell et al. . Cheuk et al. mostraram que o alelo 4R teve a maior freqüência (84%) entre sua população pesquisada; além disso, esse genótipo foi correlacionado com a presença de TDAH .

Embora esses estudos estivessem em linha com o presente estudo, considerando 4R como indicador de TDAH, estudos sobre outras populações, especificamente brancos europeus e americanos mostraram um papel maior dos alelos 7R no desenvolvimento do TDAH. Em contraste, nosso estudo não mostrou nenhuma relação significativa entre alelos 7R e TDAH.

Um outro estudo de meta-análise mostrou uma diferença significativa na relação entre TDAH e DRD4 7R em pessoas de ascendência Européia-Caucasiana e Sul-Americana versus pessoas de populações do Oriente Médio . Leung et al. relataram uma prevalência muito baixa de alelos 7R entre os asiáticos, enquanto 4R teve uma prevalência mais alta entre eles . Este relatório é consistente com os resultados do nosso estudo.

De acordo com estudos demográficos e étnicos, pode-se concluir que a filogenética pode ser estudada investigando o polimorfismo dos genes em doenças específicas. Como se vê, 4R é mais prevalente em asiáticos do que em brancos caucasianos e europeus . Alta prevalência de 4R relatada por Shahin et al. no Egito, assim como nosso estudo confirma este achado.

Entretanto, existem estudos que recusam a relação dos alelos 7R com TDAH. Carrasco et al. relatam uma relação negativa entre alelos 7R e TDAH em um estudo realizado com uma população chilena . Brookes et al. em um estudo em Taiwan não relataram relação entre biomarcadores DRD4 e TDAH .

A explicação mais óbvia para a dissemelhança dos resultados relatados são as diferenças das amostras do estudo. No entanto, o procedimento diagnóstico e as diferenças metodológicas também devem ser contabilizados. A importância de uma conclusão não se restringe a facilitar o procedimento diagnóstico, mas também pode levar à preparação de um plano de tratamento preciso para cada indivíduo. Diferenças funcionais no sistema de sinalização intracelular DRD4 foram estudadas para os alelos de repetição 48-bp, e estudos mostram que o alelo 7R pode ser menos sensível à dopamina endógena e mediar uma resposta embotada à dopamina . Se os resultados deste estudo se replicarem em outros estudos, podem indicar uma boa resposta terapêutica e um melhor prognóstico do TDAH no noroeste do Irã.

Pode-se afirmar que os portadores do alelo 4R, que aparecem freqüentemente nos pacientes com TDAH no noroeste do Irã, podem ter um prognóstico melhor do que o portador 7R, que em outras populações tem sido ligado ao TDAH. Em outras palavras, o alelo 4R se repete no gene DRD4 pode ser considerado como um diagnóstico prognóstico no distúrbio do TDAH nesta área do Irã.

9. Conclusão

Em contraste com os resultados de estudos realizados em europeus brancos e americanos, nos quais 7R foi o indicador genético de TDAH, nosso estudo mostrou 4R como a variante desta desordem no noroeste do Irã.

Conflitos de interesse

Os autores declaram não ter conflitos de interesse.

Acreditos

Este estudo foi apoiado pelo Centro de Pesquisa em Psiquiatria e Ciências Comportamentais, Universidade de Ciências Médicas Tabriz. Os autores agradecem a todos os participantes deste estudo.