Verhoeff-Van Gieson (VVG) Protocolo de Coloração para Fibras Elásticas
NovaUltra Kits Especiais de Manchas
Descrição: Este método é usado para identificar fibras elásticas em tecidos como pele, aorta, etc. em seções fixadas em formol e incluídas em parafina, e também pode ser usado em seções congeladas. As fibras elásticas serão coradas de azul-negro e o fundo será corado de amarelo.
Fixação:10% formalina.
Secção: secções de parafina a 5 um.
Soluções e Reagentes:
5% hematoxilina alcoólica:
Hematoxilina ———————————- 5 g
100% álcool ———————————- 100 ml
Misturar para dissolver com a ajuda de calor suave. Filtrar.
10% de cloreto férrico aquoso (preparar fresco, não necessário):
Cloreto férrico ——————————– 10 g
Água destilada ——————————– 100 ml
Solução de iodo de Weigert:
Iodeto de potássio —————————— 2 g
Iodo ——————————————- 1 g
Água destilada ——————————— 100 ml
Utilizar 4 ml de água destilada para dissolver o iodeto de potássio. E depois adicionar iodo. Uma vez dissolvido o iodo, diluir esta solução adicionando 96 ml de água destilada. Esta solução pode ser preparada fresca conforme necessário ou feita em grandes quantidades e armazenada em frasco castanho no escuro à temperatura ambiente.
Verhoeff’s Working Solution:
A solução de trabalho de coloração deve ser preparada fresca para melhores resultados. Não manchará satisfatoriamente se for mantida mais do que um dia útil. Prepare a solução de trabalho adicionando por ordem os seguintes reagentes:
5% de hematoxilina alcoólica ——————– 20 ml
10% de cloreto férrico —————————- 8 ml
Solução de iodo de Weigert ——————- 8 ml
Misture bem as quantidades acima (ou as proporções necessárias). A solução deve ser preta de jacto. Usar imediatamente e descartar após o uso.
2% de cloreto férrico aquoso (preparar fresco, não necessário):
10% de cloreto férrico de cima ———— 10 ml
Água destilada ——————————- 50 ml
5% de tiossulfato de sódio aquoso:
Detergente de Van Gieson:
1% fuchsin ácido aquoso ——————— 5 ml
Ácido nítrico aquoso saturado ————– 100 ml
Para tecidos nervosos podem ser preparados como se segue:
1% fuchsin ácido aquoso ——————- 15 ml
Ácido pícrico aquoso saturado ————- 50 ml
Água destilada ——————————- 50 ml
Procedimento:
1. Destilar e hidratar as lâminas para água destilada.
2. Mancha na solução de Verhoeff durante 1 hora. O tecido deve estar completamente preto.
3. Enxaguar em água da torneira com 2-3 mudanças.
5. Parar a diferenciação com várias trocas de água da torneira e verificar ao microscópio a coloração das fibras elásticas pretas e fundo cinza. É melhor diferenciar ligeiramente o tecido, uma vez que a coloração de Van Gieson subsequente pode extrair um pouco a mancha elástica.
6. Lavar as lâminas em água da torneira.
7. Trate com tiossulfato de sódio a 5% durante 1 minuto. Eliminar a solução.
8. Lave em água corrente da torneira durante 5 minutos.
9. Contaminação em solução de Van Gieson durante 3-5 minutos.
10. Desidratar rapidamente através de 95% de álcool, 2 trocas de 100% de álcool.
11. Desidratar em 2 trocas de xileno durante 3 minutos cada.
12. Lamela de cobertura com meio de montagem resinoso.