Fig. 1 illustrerar en Masson’s trichrome-färgad benyta med en nybildad, ännu inte mineraliserad osteoidyta i blått och mineraliserat ben i rött, tillsammans med ett intilliggande snitt som är dubbelt färgat för CD34 och glatt muskelaktin (SMA) med hjälp av IHC. Skiktet av plumbone-bildande osteoblaster på benytan är täckt med ett lager av SMA+ fibro-osteoblastiska förlängda kronobergsceller. Hos vuxna människor byggs inte ben upp, utan befintligt ben eroderas först och byggs sedan upp igen under en process som kallas benremodellering (Parfitt, 1994). Hos normala individer och hos patienter med primär hyperparatyreoidism (PHPT) täcker canopy den stora majoriteten av benremodelleringsställena (Hauge et al., 2001; Kristensen et al., 2013, 2014). Redan i publikationer från 1990-talet föreslogs det att de flerskiktade cellskikten ovanför benbildande ytor hos patienter med sekundär hyperparatyreoidism bestod av celler från osteoblastlinjen (Bianco och Bonucci, 1991), medan Ellen Hauge och kollegor 2001 visade att remodelleringsställen hos patienter med PHPT har en mycket omfattande canopy-täckning (Hauge et al., 2001). Tvärtom är täckningen med canopy-celler minskad hos kvinnor med postmenopausal osteoporos och hos patienter med multipelt myelom eller Cushings syndrom (Andersen et al., 2014; Hinge et al., 2015; Jensen et al., 2012). De kanopiska cellerna har sannolikt sitt ursprung i de mesenkymala benmärgshöljecellerna (BME-cellerna). BME-cellerna är placerade ovanför quiescenta ytor och bildar ett extremt försvagat cellskikt som knappt är synligt med ljusmikroskopi, men som kan visualiseras med elektronmikroskopi (EM) (Kristensen et al., 2014). BME-cellerna och canopy-cellerna avskärmar benytan från den intilliggande benmärgen, och de utgör sannolikt en viktig osteoblastprogenitorpopulation (Kristensen et al., 2014). Jämfört med benbildande osteoblaster har de preosteoblastiska canopy-cellerna långsträckta kärnor och långa cellförlängningar som morfologiskt liknar fibroblaster. De färgar positivt för osteoblastmarkörer som osterix och runx2, men även för markörer som är relaterade till nerver, glatta muskelceller, pericyter och fibroblaster som CD56 (NCAM), P3NP och SMA (Andersen et al., 2013; Hinge et al., 2015; Jensen et al., 2012; Kristensen et al., 2013, 2014). Noterbart är att osterix, runx2 och CD56 också markerar osteoblastlinjecellerna på de eroderade ytorna, omvändningscellerna och de benbildande osteoblasterna. Det är mycket troligt att BME- och canopy-celler spelar en okänd roll i regleringen av hematopoietiska stam- och progenitorceller (HSPC). För det första sammanfaller deras position med den förmodade parakrina interaktionen mellan canopy-celler och benmärgsceller, eftersom canopy täcker osteoklasterna och cellerna i osteoblastlinjen på benytan. För det andra utvecklar vissa patienter med PHPT anemi eventuellt på grund av benmärgsfibros (Bhadada et al., 2009). För det tredje visade en studie för 30 år sedan att det dominerande osseösa målet för parathormon (PTH) inte var den mogna osteoblasten utan en förmodad preosteoblastisk cell (Rouleau et al., 1988), och på senare tid påvisades PTH-receptorn 1 (PTHR1) i canopy-celler hos barn med allvarlig njursjukdom, och täckningen av exceptionellt flerskiktade canopy-celler korrelerade med PTH-nivån (Pereira et al., 2016). För det fjärde har både prekliniska och kliniska studier visat att PTH har en reglerande roll för hematopoietiska stamceller (HSC) och HSC-nischen (Brunner et al., 2007; Yu et al., 2014; Calvi et al., 2003), och en preklinisk studie visade att behandling med PTH efter benmärgstransplantation resulterade i ökad HSC-graftning (Adams et al., 2007). Patienter som behandlades med PTH under en period på 28 dagar efter dubbel navelsträngsblodtransplantation fick dock ingen snabbare eller bättre återhämtning av blodvärdena (Ballen et al., 2012). Ändå är de fibro-osteoblastiska toppcellerna, och möjligen även deras föregångare BME-cellerna, det huvudsakliga cellulära målet för PTH och oförmågan att överföra effekterna av PTH-behandling från prekliniska till kliniska studier utesluter inte möjligheten av en effekt, men understryker några av svårigheterna med att överföra resultat från unga möss med snabbt pågående benmodellering till äldre människor med långsamt pågående benmodellering.
Figur 1. Visualisering av en benbildande yta. Två bilder erhållna på intilliggande sektioner som antingen färgats med modifierad Massons trichrome (A) eller dubbelfärgats för CD34 och SMA med IHC (B). De nedre streckade linjerna visar konturerna av benytan medan de övre linjerna visar konturerna av krontaket. Den nybildade icke-mineraliserade osteoidytan är blå, medan det mineraliserade benet är rött (A). Observera att endast de fibro-osteoblastiska långsträckta canopy-cellerna färgar positivt för SMA, medan de mer lodräta benbildande osteoblasterna färgar negativt (B). Gula och svarta pilspetsar indikerar en kapillär. Skala = 25 μm. Sektionerna är hämtade från en paraffininbäddad benmärgsbiopsi från en 57-årig frisk kvinnlig volontär (Dansk National Committee on Biomedical Research Ethics projekt ID # S-20110112).
.