New drostanolone metabolites in human urine by liquid chromatography time-of-flight tandem mass spectrometry and their application for doping control

Drostanolon ist eines der am häufigsten nachgewiesenen anabolen androgenen Steroide in der Dopingkontrollanalyse. Hier untersuchten wir Drostanolon-Stoffwechselprofile im Urin mit Hilfe der Flüssigchromatographie-Quadruple-Time-of-Flight-Massenspektrometrie (LC-QTOF-MS) im Full-Scan- und gezielten MS/MS-Modus mit genauer Massenmessung. Die Droge wurde einem gesunden männlichen Probanden verabreicht, und zur Analyse der Urinproben wurden Flüssig-Flüssig-Extraktion und Direktinjektion verwendet. Chromatografische Peaks für potenzielle Metaboliten wurden mit dem theoretischen – als Zielion in einem Full-Scan-Experiment identifiziert und tatsächliche deprotonierte Ionen wurden im gezielten MS/MS-Modus analysiert. Elf Metaboliten, darunter fünf neue Sulfate, fünf Glucuronidkonjugate und ein freier Metabolit, wurden für Drostanolon bestätigt. Da keine brauchbaren Fragment-Ionen zur Darstellung der Steroidringstruktur der Phase-II-Metaboliten von Drostanolon vorhanden waren, wurde die Gaschromatographie-Massenspektrometrie (GC-MS) verwendet, um strukturelle Details des trimethylsilylierten Phase-I-Metaboliten zu erhalten, der nach enzymatischer Hydrolyse freigesetzt wurde, und es wurde eine potenzielle Struktur unter Verwendung eines kombinierten MS-Ansatzes vorgeschlagen. Die Nachweiszeiten der Metaboliten wurden aufgezeichnet und S4 (2α-Methyl-5α-androstan-17-one-6β-ol-3α-sulfat) und G1 (2α-Methyl-5α-androstan-17-one-3α-glucuronid) wurden als neue potenzielle Biomarker für Drostanolon-Missbrauch angesehen, die bis zu 24 Tage durch Flüssig-Flüssig-Extraktion und 7 Tage durch Direktinjektionsanalyse nach intramuskulärer Injektion nachgewiesen werden können. S4 und G1 wurden auch in zwei Drostanolon-positiven Routineurinproben nachgewiesen.