Verhoeff-Van Gieson (VVG) Färbeprotokoll für elastische Fasern
NovaUltra Special Stain Kits
Beschreibung: Diese Methode wird zur Identifizierung von elastischen Fasern in Geweben wie Haut, Aorta usw. auf formalinfixierten, in Paraffin eingebetteten Schnitten verwendet und kann auch für Gefrierschnitte verwendet werden. Die elastischen Fasern werden blauschwarz und der Hintergrund gelb gefärbt.
Fixierung:10% Formalin.
Schnitt: Paraffinschnitte bei 5 um.
Lösungen und Reagenzien:
5%-iges alkoholisches Hämatoxylin:
Hämatoxylin ———————————- 5 g
100%-iger Alkohol ———————————- 100 ml
Mischen, um es mit Hilfe von leichter Hitze aufzulösen. Filtern.
10%iges wässriges Eisenchlorid (frisch ansetzen, nicht notwendig):
Eisenchlorid ——————————– 10 g
Destilliertes Wasser ——————————– 100 ml
Weigert’sche Jodlösung:
Kaliumjodid —————————— 2 g
Jod ——————————————- 1 g
Destilliertes Wasser ——————————— 100 ml
Kaliumjodid mit 4 ml destilliertem Wasser auflösen. Gib dann Jod hinzu. Sobald das Jod aufgelöst ist, verdünnt man diese Lösung durch Zugabe von 96 ml destilliertem Wasser. Diese Lösung kann je nach Bedarf frisch zubereitet oder in größeren Mengen hergestellt und in einer braunen Flasche im Dunkeln bei Raumtemperatur aufbewahrt werden.
Verhoeffs Arbeitslösung:
Die Arbeitsfärbelösung sollte für beste Ergebnisse frisch zubereitet werden. Sie färbt nicht zufriedenstellend, wenn sie länger als einen Arbeitstag aufbewahrt wird. Bereiten Sie die Arbeitslösung vor, indem Sie die folgenden Reagenzien in dieser Reihenfolge hinzufügen:
5%iges alkoholisches Hämatoxylin ——————– 20 ml
10%iges Eisenchlorid —————————- 8 ml
Weigert’sche Jodlösung ——————- 8 ml
Die oben genannten Mengen (oder die erforderlichen Anteile davon) gut mischen. Die Lösung sollte tiefschwarz sein. Sofort verwenden und nach Gebrauch verwerfen.
2%iges wässriges Eisenchlorid (frisch ansetzen, nicht notwendig):
10%iges Eisenchlorid von oben ———— 10 ml
Destilliertes Wasser ——————————- 50 ml
5%iges wässriges Natriumthiosulfat:
Van Gieson’s Gegenfärbung:
1% wässriges saures Fuchsin ——————— 5 ml
Gesättigte wässrige Pikrinsäure ————– 100 ml
Für Nervengewebe kann wie folgt vorbereitet werden:
1% wässriges saures Fuchsin ——————- 15 ml
Gesättigte wässrige Pikrinsäure ————- 50 ml
Destilliertes Wasser ——————————- 50 ml
Vorgehen:
1. Objektträger entparaffinieren und in destilliertem Wasser hydratisieren.
2. 1 Stunde lang in Verhoeff’scher Lösung färben. Das Gewebe sollte vollständig schwarz sein.
3. In Leitungswasser mit 2-3 Wechseln spülen.
4. 1-2 Minuten lang in 2%igem Eisenchlorid differenzieren.
5. Die Differenzierung durch mehrmaliges Wechseln des Leitungswassers beenden und mikroskopisch auf schwarze Färbung der elastischen Fasern und grauen Hintergrund prüfen. Es ist besser, das Gewebe leicht zu unterdifferenzieren, da die anschließende Van Gieson’sche Gegenfärbung die elastische Färbung etwas herausziehen kann.
6. Objektträger in Leitungswasser waschen.
7. 1 Minute lang mit 5%igem Natriumthiosulfat behandeln. Lösung verwerfen.
8. 5 Minuten lang unter fließendem Leitungswasser waschen.
9. Gegenfärbung in Van Gieson’s Lösung für 3-5 Minuten.
10. Schnell mit 95%igem Alkohol entwässern, 2 Mal mit 100%igem Alkohol wechseln.
11. Klären in 2 Wechseln von Xylol für je 3 Minuten.
12. Deckglas mit harzhaltigem Einbettungsmaterial abdecken.