Protocolo de tinción Verhoeff-Van Gieson (VVG) para fibras elásticas
Kits de tinción especial NovaUltra
Descripción: Este método se utiliza para identificar las fibras elásticas en tejidos como la piel, la aorta, etc. en secciones fijadas con formalina e incluidas en parafina, y puede utilizarse también para secciones congeladas. Las fibras elásticas se teñirán de azul-negro y el fondo se teñirá de amarillo.
Fijación: formalina al 10%.
Sección: secciones de parafina a 5 um.
Soluciones y reactivos:
Hematoxilina alcohólica al 5%:
Hematoxilina ———————————- 5 g
Alcohol 100% ———————————- 100 ml
Mezclar para disolver con ayuda de calor suave. Filtrar.
Cloruro férrico acuoso al 10% (preparar fresco, no es necesario):
Cloruro férrico ——————————– 10 g
Agua destilada ——————————– 100 ml
Solución de yodo de Weigert:
Yoduro de potasio —————————— 2 g
Yodo ——————————————- 1 g
Agua destilada ——————————— 100 ml
Utilizar 4 ml de agua destilada para disolver el yoduro de potasio. Y a continuación añade el yodo. Una vez disuelto el yodo, diluir esta solución añadiendo 96 ml de agua destilada. Esta solución puede prepararse fresca según sea necesario o hacerse en cantidades mayores y almacenarse en una botella marrón en la oscuridad a temperatura ambiente.
Solución de trabajo de Verhoeff:
La solución de tinción de trabajo debe hacerse fresca para obtener los mejores resultados. No se tiñe satisfactoriamente si se conserva más de un día laborable. Prepare la solución de trabajo añadiendo en orden los siguientes reactivos:
Hematoxilina alcohólica al 5% ——————– 20 ml
Cloruro férrico al 10% —————————- 8 ml
Solución de yodo de Weigert ——————- 8 ml
Mezcle bien las cantidades anteriores (o las proporciones necesarias). La solución debe ser de color negro intenso. Utilizar inmediatamente y desechar después de su uso.
Cloruro férrico acuoso al 2% (preparar fresco, no es necesario):
Cloruro férrico al 10% de lo anterior ———— 10 ml
Agua destilada ——————————- 50 ml
Tiosulfato sódico acuoso al 5%:
Contratinción de Van Gieson:
Fucsina ácida acuosa al 1% ——————— 5 ml
Ácido pícrico acuoso saturado ————– 100 ml
Para los tejidos nerviosos puede prepararse como sigue:
Fucsina ácida acuosa al 1% ——————- 15 ml
Ácido pícrico acuoso saturado ————- 50 ml
Agua destilada ——————————- 50 ml
Procedimiento:
1. Desparafinar e hidratar los portaobjetos en agua destilada.
2. Teñir en solución de Verhoeff durante 1 hora. El tejido debe quedar completamente negro.
3. Aclarar en agua del grifo con 2-3 cambios.
4. Diferenciar en cloruro férrico al 2% durante 1-2 minutos.
5. Detener la diferenciación con varios cambios de agua del grifo y comprobar al microscopio la tinción de fibras elásticas negras y el fondo gris. Es mejor sub-diferenciar ligeramente el tejido, ya que la posterior contratinción de Van Gieson puede extraer un poco la tinción elástica.
6. Lavar los portaobjetos en agua del grifo.
7. Tratar con tiosulfato de sodio al 5% durante 1 minuto. Desechar la solución.
8. Lavar en agua corriente del grifo durante 5 minutos.
9. Contratener en la solución de Van Gieson durante 3-5 minutos.
10. Deshidratar rápidamente a través de alcohol 95%, 2 cambios de alcohol 100%.
11. Despejar en 2 cambios de xileno durante 3 minutos cada uno.
12. Cubrir con medio de montaje resinoso.