La determinación de la grasa fecal en 72 horas se utiliza como patrón de oro para documentar la presencia de esteatorrea. Aunque la tinción de Sudán para la grasa fecal se defiende como una prueba de cribado sensible, se carece de una correlación cuantitativa entre la cuantificación de la grasa fecal de 72 h y la tinción de Sudán fecal. Este estudio fue diseñado para examinar las propiedades de tinción de diferentes clases de lípidos purificados en una matriz artificial definida experimentalmente, y para dilucidar las razones de la falta de correlación cuantitativa entre estas dos pruebas. Nuestros resultados indican que la tinción de «grasa neutra» sin acidificación ni calentamiento identifica los triglicéridos; y a un pH adecuado, la «tinción neutra» también identifica los ácidos grasos. La tinción de «grasa dividida» con acidificación y calentamiento identifica tanto los triglicéridos como los ácidos grasos. Tras la acidificación, los jabones de ácidos grasos se convierten en ácido graso no ionizado. Así, los jabones de ácidos grasos pueden identificarse indirectamente como gotas de grasa que se tiñen con la tinción de grasa dividida. Aunque el colesterol se tiñe con la tinción de Sudán tras el calentamiento, al enfriarse, el colesterol forma cristales de colesterol anhidro, lo que hace que su patrón de tinción sea distinto. Ni la tinción de grasa neutra ni la de grasa dividida pueden detectar fosfolípidos o ésteres de colesterol. La determinación de la grasa fecal en 72 horas es una medida del contenido total de ácidos grasos tras la saponificación de una muestra. Los ácidos grasos resultantes provienen de una variedad de fuentes endógenas y exógenas, incluyendo ácidos grasos libres, jabones de ácidos grasos, triglicéridos, ésteres de colesterol y fosfolípidos. Por lo tanto, la cuantificación de la grasa fecal de 72 h no distingue entre las fuentes primarias del ácido graso medido. Se concluye que la determinación de grasa fecal de 72 h no es específica para documentar la malabsorción de triglicéridos (grasa). Hasta que se desarrollen nuevos métodos que midan específicamente los triglicéridos y los ácidos grasos fecales, la tinción de Sudán de la grasa fecal parece ser un método más específico para detectar la presencia de triglicéridos y ácidos grasos en una matriz.
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