New drostanolone metabolites in human urine by liquid chromatography time-of-flight tandem mass spectrometry and their application for doping control

Drostanolone on yksi yleisimmin havaituista anabolisista androgeenisista steroideista dopingvalvonnan analyyseissä. Tässä tutkimme drostanolonin virtsan aineenvaihduntaprofiileja käyttämällä nestekromatografian nelinkertaista lentoaikamassaspektrometriaa (LC-QTOF-MS) full scan- ja kohdennetussa MS/MS-tilassa tarkalla massamittauksella. Lääke annettiin yhdelle terveelle miespuoliselle vapaaehtoiselle, ja virtsanäytteiden analysoinnissa käytettiin neste-nesteuuttoa sekä suoraa injektiota. Mahdollisten metaboliittien kromatografiset piikit tunnistettiin teoreettisen – kohdeionin avulla full scan -kokeessa ja todelliset deprotonoidut ionit analysoitiin kohdennetussa MS/MS-tilassa. Yksitoista metaboliittia, mukaan lukien viisi uutta sulfaattia, viisi glukuronidikonjugaattia ja yksi vapaa metaboliitti, vahvistettiin drostanolonille. Koska käyttökelpoisia fragmentti-ioneja drostanolonin vaiheen II metaboliittien steroidirengasrakenteen havainnollistamiseksi ei ollut, kaasukromatografiamassaspektrometriaa (GC-MS) käytettiin entsymaattisen hydrolyysin jälkeen vapautuneen trimetyylisilyloidun vaiheen I metaboliitin rakenteellisten yksityiskohtien selvittämiseksi, ja potentiaalista rakennetta ehdotettiin yhdistetyn MS-menetelmän avulla. Metaboliittien havaitsemisajat kirjattiin, ja S4:n (2α-metyyli-5α-androstan-17-one-6β-ol-3α-sulfaatti) ja G1:n (2α-metyyli-5α-androstan-17-one-3α-glukuronidi) ajateltiin olevan uusia potentiaalisia drostanolonin väärinkäytön biomarkkereita, jotka voidaan havaita jopa 24 vuorokauden ajan nestemäisellä uuttamismenetelmällä ja 7 vuorokauden ajan suoralla injektioanalyysillä lihaksensisäisen pistoksen jälkeen. S4 ja G1 havaittiin myös kahdessa drostanolonipositiivisessa rutiinivirtsanäytteessä.