Verhoeff-Van Giesonin (VVG) värjäysprotokolla kimmoisille kuiduille
NovaUltra-erikoisvärjäyssarjat
Kuvaus: Tätä menetelmää käytetään elastisten kuitujen tunnistamiseen kudoksissa, kuten ihossa, aortassa jne. formaliinilla kiinnitetyissä, parafiiniin upotetuissa leikkeissä, ja sitä voidaan käyttää myös jäädytetyissä leikkeissä. Elastiset kuidut värjäytyvät sinimustiksi ja tausta värjäytyy keltaiseksi.
Fiksaatio: 10 % formaliini.
Leikkaus: Parafiinileikkaukset 5 um:ssa.
Liuokset ja reagenssit:
5 %:n alkoholipitoinen hematoksyliini:
Hematoksyliini ———————————- 5 g
100 %:n alkoholi ———————————- 100 ml
Sekoitetaan liukenemaan hellävaraisen kuumennuksen avulla. Suodatetaan.
10 % vesipitoinen rautakloridi (valmistetaan tuoreena, ei välttämätöntä):
Ferrikloridi ——————————– 10 g
Tislattu vesi ——————————– 100 ml
Weigertin jodiliuos:
Kaliumjodidi —————————— 2 g
Jodi ——————————————- 1 g
Tislattu vesi ——————————— 100 ml
Käytä 4 ml tislattua vettä kaliumjodidin liuottamiseen. Ja lisää sitten jodi. Kun jodi on liuennut, laimenna tämä liuos lisäämällä 96 ml tislattua vettä. Tämä liuos voidaan valmistaa tuoreena tarpeen mukaan tai tehdä suurempia määriä ja säilyttää ruskeassa pullossa pimeässä huoneenlämmössä.
Verhoeffin työliuos:
Työvärjäysliuos on valmistettava tuoreena parhaiden tulosten saavuttamiseksi. Se ei värjää tyydyttävästi, jos sitä säilytetään yli yhden työpäivän. Valmistetaan työliuos lisäämällä järjestyksessä seuraavat reagenssit:
5-prosenttinen alkoholipitoinen hematoksyliini ——————– 20 ml
10-prosenttinen rautakloridi —————————- 8 ml
Weigertin jodiliuos ——————- 8 ml
Sekoitetaan edellä mainitut määrät (tai niiden tarvittavat suhteet) hyvin. Liuoksen pitäisi olla sysimustaa. Käytetään välittömästi ja hävitetään käytön jälkeen.
2 % vesipitoinen ferrikloridi (valmistetaan tuoreena, ei välttämätöntä):
10 % ferrikloridi edellä mainitusta ———— 10 ml
Tislattu vesi ——————————- 50 ml
5 %:n vesipitoinen natriumtiosulfaatti:
Van Giesonin vastalääke:
1 %:n vesipitoinen happofuchsiini ——————— 5 ml
Kyllästetty vesipitoinen pikriinihappo ————– 100 ml
Hermokudoksia varten voidaan valmistaa seuraavasti:
1 %:n vesipitoinen happofuchsiini ——————- 15 ml
Kyllästetty vesipitoinen pikriinihappo ————- 50 ml
Tislattu vesi ——————————- 50 ml
Menetelmä:
1. Deparaffinoidaan ja hydratoidaan objektilasit tislattuun veteen.
2. Värjätään Verhoeffin liuoksessa 1 tunnin ajan. Kudoksen tulee olla täysin musta.
3. Huuhtele vesijohtovedellä 2-3 vaihtoa.
4. Eriytetään 2-prosenttisessa ferrikloridissa 1-2 minuutin ajan.
5. Lopeta erilaistaminen useilla vesijohtoveden vaihdoilla ja tarkista mikroskooppisesti mustien elastisten kuitujen värjäytyminen ja harmaa tausta. Kudos on parempi erilaistaa hieman vajaasti, koska myöhempi Van Giesonin vastavärjäys voi irrottaa elastisen värjäyksen jonkin verran.
6. Pese objektilasit vesijohtovedellä.
7. Käsittele 5 % natriumtiosulfaatilla 1 minuutin ajan. Hävitä liuos.
8. Pese juoksevassa vesijohtovedessä 5 minuuttia.
9. Vastavärjätään Van Giesonin liuoksella 3-5 minuuttia.
10. Kuivataan nopeasti 95-prosenttisella alkoholilla, 2 vaihtoa 100-prosenttista alkoholia.
11. Kirkasta kahdessa ksyleenivaihdossa 3 minuutin ajan kummassakin.
12. Peitetään pinnoite hartsipitoisella kiinnitysalustalla.