Protocole de coloration de Verhoeff-Van Gieson (VVG) pour les fibres élastiques
Kits de coloration spéciale NovaUltra
Description : Cette méthode est utilisée pour identifier les fibres élastiques dans les tissus tels que la peau, l’aorte, etc. sur des sections fixées au formol et incluses dans la paraffine, et peut également être utilisée pour les sections congelées. Les fibres élastiques seront colorées en bleu-noir et le fond sera coloré en jaune.
Fixation:formaline à 10%.
Section : sections de paraffine à 5 um.
Solutions et réactifs :
Hématoxyline alcoolique à 5%:
Hématoxyline ———————————- 5 g
Alcool à 100% ———————————- 100 ml
Mélanger pour dissoudre à l’aide d’une chaleur douce. Filtrer.
Chlorure ferrique aqueux à 10 % (préparer frais, pas nécessaire) :
Chlorure ferrique ——————————– 10 g
Eau distillée ——————————– 100 ml
Solution d’iode de Weigert :
Iodure de potassium —————————— 2 g
Iode ——————————————- 1 g
Eau distillée ——————————— 100 ml
Utilisez 4 ml d’eau distillée pour dissoudre l’iodure de potassium. Puis ajoutez l’iode. Une fois l’iode dissous, diluez cette solution en ajoutant 96 ml d’eau distillée. Cette solution peut être préparée fraîche au besoin ou faite en plus grande quantité et conservée dans une bouteille brune dans l’obscurité à température ambiante.
Solution de travail de Verhoeff :
La solution de coloration de travail doit être préparée fraîche pour obtenir les meilleurs résultats. Elle ne donnera pas une coloration satisfaisante si elle est conservée plus d’un jour ouvrable. Préparez la solution de travail en ajoutant dans l’ordre les réactifs suivants :
hématoxyline alcoolique à 5% ——————– 20 ml
chlorure ferrique à 10% —————————- 8 ml
solution d’iode de Weigert ——————- 8 ml
Bien mélanger les quantités ci-dessus (ou les proportions nécessaires de celles-ci). La solution doit être d’un noir de jais. Utiliser immédiatement et jeter après usage.
Chlorure ferrique aqueux à 2% (préparer frais, ce n’est pas nécessaire):
Chlorure ferrique à 10% de ce qui précède ———— 10 ml
Eau distillée ——————————- 50 ml
Thiosulfate de sodium aqueux à 5%:
Contre-coloration de Van Gieson :
Fuchsine acide à 1% ——————— 5 ml
Acide picrique aqueux saturé ————– 100 ml
Pour les tissus nerveux peuvent être préparés comme suit :
Fuchsine acide aqueuse à 1% ——————- 15 ml
Acide picrique aqueux saturé ————- 50 ml
Eau distillée ——————————- 50 ml
Procédure :
1. Déparaffiner et hydrater les lames à l’eau distillée.
2. coloration dans la solution de Verhoeff pendant 1 heure. Le tissu doit être complètement noir.
3. Rincer à l’eau du robinet avec 2 ou 3 changements.
4. différencier dans du chlorure ferrique à 2% pendant 1 à 2 minutes.
5. Arrêter la différenciation avec plusieurs changements d’eau du robinet et vérifier au microscope la coloration noire des fibres élastiques et le fond gris. Il est préférable de sous différencier légèrement le tissu, car la contre-coloration de Van Gieson qui suit peut extraire quelque peu la coloration élastique.
6. lavez les lames dans l’eau du robinet.
7. traitez avec du thiosulfate de sodium à 5% pendant 1 minute. Jetez la solution.
8. laver à l’eau courante du robinet pendant 5 minutes.
9. Contre-coloration dans la solution de Van Gieson pendant 3 à 5 minutes.
10. Déshydrater rapidement par l’alcool à 95%, 2 changements d’alcool à 100%.
11. Clair dans 2 changements de xylène pendant 3 minutes chacun.
12. Couvrir les lamelles avec un milieu de montage résineux.