L’objectif global de ce test d’inhibition de l’hémagglutination est de mesurer les titres d’anticorps contre des virus spécifiques d’intérêt. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la vaccinologie sur l’immunité et la protection médiées par le vaccin au sein de différentes populations et dans divers groupes d’âge et de patients. Les principaux avantages de cette technique sont qu’elle est précise et qu’elle permet de déterminer rapidement le titre de la présence d’anticorps neutralisants.
Bien que cette méthode puisse donner un aperçu des titres d’anticorps humains, elle peut également être appliquée à d’autres systèmes, comme les titres d’anticorps pour le sérum de souris, également les surnageants de culture. Commencez par étiqueter des plaques de microtitration de 96 puits avec les informations expérimentales appropriées. Tournez ensuite la plaque en orientation verticale et utilisez une pipette multicanaux pour ajouter 25 microlitres de PBS à chaque puits, à l’exception du premier puits de la rangée inférieure de titrage arrière.
Ajoutez 50 microlitres de la solution d’antigène d’intérêt fraîchement préparée au premier puits de la rangée de titrage arrière, puis ajoutez 25 microlitres d’échantillons de sérum traités par RDE aux premiers puits des dix rangées supérieures. Ajouter 25 microlitres de l’antisérum approprié dans le premier puits de la 11ème rangée comme contrôle positif. Le transfert de 25 microlitres du premier puits de chaque rangée à leurs puits successifs pour effectuer des dilutions en série, deux fois.
Pipette de haut en bas 10 à 15 fois pour chaque étape de dilution, en jetant les 25 derniers microlitres des derniers puits. Ensuite, ajoutez 25 microlitres de la solution d’antigène à chaque puits des rangées un à 11 et 25 microlitres de PBS uniquement à chaque puits de la rangée de titrage arrière. Tapoter soigneusement la plaque 10 fois sur les quatre côtés pour mélanger.
Puis couvrir la plaque pendant 30 minutes à température ambiante. A la fin de l’incubation, ajoutez 50 microlitres de solution de globules rouges dans chaque puits et mélangez la plaque en tapant davantage. Puis couvrir à nouveau la plaque et incuber les globules rouges en fonction des espèces utilisées comme indiqué dans le tableau.
Après avoir ajouté les globules rouges à la plaque, respecter le temps d’incubation approprié pour le type de sang utilisé dans le test. Une incubation trop courte ou trop longue conduira à une interprétation incorrecte des résultats. A la fin de l’incubation, évaluer l’hémagglutination en inclinant la plaque à 90 degrés pendant 25 secondes et marquer les résultats pour chaque puits, alors que la plaque est encore inclinée, sur un schéma imprimé de la plaque 96 puits.
Dans cette expérience, la réponse anticorps induite par le vaccin a été évaluée chez 26 volontaires sains qui ont reçu un vaccin antigrippal trivalent inactivé contenant la grippe A/H1N1/Californie/2009, A/H3N2/Texas/2012 et B/Massachusetts/O2/2012 avant la saison grippale 24 2015. Une réponse immunitaire à réaction croisée pour les souches virales A/H3N2/Suisse/2013 et A/H3N2/Texas/2012 a été observée, avec des titres d’inhibition d’hémagglutination moyens géométriques significativement plus faibles et une séroprotection induite contre la grippe A/H3N2/Suisse/2013 par rapport à la grippe A/H3N2/Texas/2012. Après la vaccination, les titres d’anticorps contre les deux souches ont augmenté, même si la souche A/H3N2/Suisse/2013 n’était pas présente dans le vaccin.
L’hémagglutinine virale démontre un potentiel dépendant de l’espèce pour l’hémagglutination des érythrocytes. Il est intéressant de noter que le sang de cobaye ne s’hémagglutine pas correctement avec l’influenza B et que le sang de dinde a le potentiel d’hémagglutination avec des titres élevés et une faible réactivité croisée. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en trois heures si elle est effectuée correctement.
Lorsque l’on tente cette procédure, il est important de se rappeler de faire un sérum avec RDE pour inactiver tout inhibiteur non spécifique et toute liaison non spécifique pendant l’hémagglutination du virus. Après cette procédure, d’autres méthodes comme l’ELISA peuvent être utilisées pour répondre à d’autres questions sur le rôle des immunoglobulines spécifiques de chaque pathogène. Après son développement, cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de l’immunologie virale pour approfondir notre compréhension de l’immunité liée au vaccin chez les patients sains et immunodéprimés au sein de différents groupes d’âge.
Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de réaliser un test d’inhibition de l’hémagglutination pour quantifier les titres d’anticorps spécifiques de la souche grippale à grande échelle. N’oubliez pas que travailler avec des antigènes viraux, du sang animal et des échantillons de sérum humain peut être extrêmement dangereux et que des précautions telles que le travail dans un laboratoire BSL2 doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure.