New drostanolone metabolites in human urine by liquid chromatography time-of-flight tandem mass spectrometry and their application for doping control

A drostanolon az egyik leggyakrabban kimutatott anabolikus androgén szteroid a doppingellenőrzésben. Itt a drostanolon vizelet metabolikus profilját vizsgáltuk folyadékkromatográfiás négyszeres repülési idejű tömegspektrometriával (LC-QTOF-MS) teljes letapogatású és célzott MS/MS üzemmódban, pontos tömegméréssel. A gyógyszert egy egészséges férfi önkéntesnek adtuk be, és a vizeletminták elemzéséhez folyadék-folyadék extrakciót, valamint közvetlen injektálást alkalmaztunk. A potenciális metabolitok kromatográfiás csúcsait az elméleti – mint célionnal azonosították a full scan kísérletben, a tényleges deprotonált ionokat pedig célzott MS/MS üzemmódban elemezték. Tizenegy metabolitot, köztük öt új szulfátot, öt glükuronidkonjugátumot és egy szabad metabolitot igazoltak a drostanolon esetében. Mivel a drostanolon II. fázisú metabolitjainak szteroid gyűrűszerkezetét szemléltető hasznos fragmentionok hiányában gázkromatográfiás tömegspektrometriát (GC-MS) alkalmaztunk az enzimatikus hidrolízis után felszabaduló trimetilszililált I. fázisú metabolit szerkezeti részleteinek meghatározására, és kombinált MS-megközelítéssel javasoltunk egy lehetséges szerkezetet. A metabolitok kimutatási idejét rögzítettük, és az S4 (2α-metil-5α-androsztán-17-one-6β-ol-3α-szulfát) és a G1 (2α-metil-5α-androsztán-17-one-3α-glükuronid) a drosztanolonnal való visszaélés új potenciális biomarkereinek tűntek, amelyek akár 24 napig is kimutathatók folyadék-folyadék extrakcióval és 7 napig az intramuszkuláris beadást követő közvetlen injekciós elemzéssel. Az S4-et és a G1-et két drostanolon-pozitív rutin vizeletmintában is kimutatták.