Verhoeff-Van Gieson (VVG) festési protokoll rugalmas rostokhoz
NovaUltra Special Stain Kits
Megnevezés: Ez a módszer az elasztikus rostok azonosítására szolgál olyan szövetekben, mint a bőr, aorta stb. formalinnal fixált, paraffinba ágyazott metszeteken, és használható fagyasztott metszeteken is. Az elasztikus rostok kék-feketére, a háttér pedig sárgára festődik.
Fixálás: 10%-os formalin.
Szelet: 5 um-os paraffinszelvények.
Solutions and Reagents (oldatok és reagensek):
5%-os alkoholos hematoxilin:
Hematoxilin ———————————- 5 g
100%-os alkohol ———————————- 100 ml
Keverjük össze, hogy enyhe hő segítségével feloldódjon. Szűrje le.
10%-os vizes vas(III)-klorid (frissen készítsük, nem szükséges):
Vas(III)-klorid ——————————– 10 g
Desztillált víz ——————————– 100 ml
Weigert jódoldat:
Kálium-jodid —————————— 2 g
Jód ——————————————- 1 g
Desztillált víz ——————————— 100 ml
4 ml desztillált vízzel oldjuk fel a kálium-jodidot. Ezután adjunk hozzá jódot. Miután a jód feloldódott, hígítsuk fel ezt az oldatot 96 ml desztillált víz hozzáadásával. Ez az oldat szükség szerint frissen is elkészíthető, vagy nagyobb mennyiségben is elkészíthető, és barna üvegben, sötétben, szobahőmérsékleten tárolható.
Verhoeff-féle munkaoldat:
A munkafestő oldatot a legjobb eredmény érdekében frissen kell elkészíteni. Nem fog kielégítően festeni, ha egy munkanapnál tovább tároljuk. Készítse el a munkaoldatot a következő reagensek sorrendben történő hozzáadásával:
5%-os alkoholos hematoxilin ——————– 20 ml
10%-os vas-klorid —————————- 8 ml
Weigert jódoldat ——————- 8 ml
A fenti mennyiségeket (vagy azok szükséges arányait) jól keverjük össze. Az oldatnak koromfeketének kell lennie. Használja fel azonnal, és használat után dobja ki.
2%-os vizes vas-klorid (frissen készítsük, nem szükséges):
10%-os vas-klorid a fentiekből ———— 10 ml
desztillált víz ——————————- 50 ml
5%-os vizes nátrium-tioszulfát:
Van Gieson ellenfesték:
1%-os vizes savas fuchsin ——————— 5 ml
Telített vizes pikrinsav ————– 100 ml
Idegszövetekhez a következőképpen készíthető:
1%-os vizes savas fuchsin ——————- 15 ml
Telített vizes pikrinsav ————- 50 ml
Desztillált víz ——————————- 50 ml
Eljárás:
1. Deparaffinizáljuk és hidratáljuk a tárgylemezeket desztillált vízzel.
2. Festjük Verhoeff oldatban 1 órán keresztül. A szövetnek teljesen feketének kell lennie.
3. Öblítse le csapvízben 2-3 váltással.
4. Differenciáljuk 2%-os vas-kloridban 1-2 percig.
5. Állítsa le a differenciálást többszöri csapvízcserével, és mikroszkóposan ellenőrizze a fekete elasztikus szálak elszíneződését és a szürke hátteret. Jobb, ha kissé aluldifferenciáljuk a szövetet, mivel az ezt követő Van Gieson ellenfestés némileg kivonhatja az elasztikus festéket.
6. Mossa ki a tárgylemezeket csapvízzel.
7. Kezelje 5%-os nátrium-tioszulfáttal 1 percig. Dobja el az oldatot.
8. Mossuk folyó csapvízben 5 percig.
9. Ellenfestjük Van Gieson-oldatban 3-5 percig.
10. Gyorsan dehidratáljuk 95%-os alkohollal, 2 váltás 100%-os alkohollal.
11. Tisztítsuk 2 váltás xilolban, egyenként 3 percig.
12. Fedjük le gyantás montírozó közeggel.