Insolarea bacteriilor

Introducere

Există aproximativ 10.000 de specii de microbi denumite. Se estimează că mai există între 10.000 și 100.000 de specii neidentificate pentru fiecare specie identificată. Nu numai că există multe tipuri de bacterii, dar există și o mulțime de bacterii individuale. O singură lingură de sol poate avea 100 de milioane de bacterii individuale. O răzuire a gingiilor dvs. poate produce 1 milion de bacterii pe cm2 (un cm2 este aproximativ de mărimea unghiei mici). Bacteriile din și de pe corpul nostru reprezintă aproximativ 10% din greutatea noastră corporală uscată.

Majoritatea speciilor de bacterii cunoscute în prezent au fost identificate cu ajutorul tehnicilor microbiologice tradiționale, cum ar fi reacția de colorare Gram, morfologia și reacțiile metabolice. Bacteriile trăiesc rareori singure, ci în comunități cu alte bacterii. Acest lucru este valabil atât în mediul înconjurător, cât și în și pe corpul nostru. Acest curs se concentrează asupra rolului bacteriilor în boli. Izolarea unei singure specii de bacterii este primul pas în identificarea bacteriilor posibil responsabile de un proces patologic.

Prima cerință pentru izolarea fizică a unei bacterii este ca aceasta să poată fi cultivată în laborator. Acest lucru necesită cunoașterea temperaturii optime pentru creștere, a cerințelor optime de oxigen și a nevoilor nutriționale optime. În acest curs lucrăm cu un număr foarte limitat de bacterii. Bacteriile cu care lucrăm sunt, de asemenea, foarte ușor de cultivat în laborator. Cele mai multe bacterii nu sunt atât de agreabile!

Există două modalități principale de izolare a organismelor.

1. Dezlipirea pentru izolare pe o placă de agar
2. Metoda plăcii turnate

Dezlipirea pentru izolare pe o placă de agar presupune diluarea succesivă a organismelor până când aveți celulele la o densitate suficient de mică pentru ca celulele individuale să fie izolate fizic în spațiu pentru a da naștere la colonii individuale recognoscibile. În metoda plăcii turnate, vă diluați suficient proba înainte de a o adăuga la agar topit răcit și apoi turnați acest amestec într-o farfurie. Celulele izolate dau naștere la colonii individuale care cresc în agar. Această tehnică poate fi un pic mai dificilă. Dacă agarul topit este prea fierbinte, veți ucide toate bacteriile. Dacă agarul topit este prea rece, vă veți trezi cu un bulgăre mare în vasul Petri. Metoda striației permite obținerea de colonii individuale pe suprafața agarului. Această tehnică este mult mai rapidă și mai ușor de stăpânit.

Vizualizare generală

Vă veți primi o probă de bulion care conține trei organisme, Staphylococcus xylosus, Serratia marsescens și Escherichia. coli.

Toate cele trei organisme se dezvoltă cu ușurință aerob pe agarul triptic de soia (TSA). Cu toate acestea, S. marsescens formează un pigment roșu numai la 35°C sau mai puțin și în mod optim la temperatura camerei (25°C). Se dezvoltă foarte rapid la toate temperaturile în colonii de mărime medie.

E. coli are un aspect cafeniu la toate temperaturile și este, de asemenea, un organism care se dezvoltă rapid și formează colonii mari.

S. xylosus are un aspect galben-portocaliu la toate temperaturile, se dezvoltă rapid și formează colonii de mărime medie spre mare.

Capacitatea dumneavoastră de a izola și de a vedea cele trei organisme de pe placă depinde de condițiile de incubare adecvate. Plăcile dvs. vor fi incubate la temperatura camerei timp de 48 de ore. Ar trebui să fiți capabili să identificați cele trei organisme pe baza mărimii coloniei și a pigmentului.

Materiale

• 1 cultură mixtă în tub de bulion triptic de soia (TSB) conținând Staphylococcus xylosus, Serratia marsescens și Escherichia. Coli (toate BSL2)
• 3 plăci TSA

Procedură de streaking pentru izolare

Există mai multe metode de streaking pentru izolare. Marea majoritate a studenților noștri au avut cel mai mare succes cu metoda de întindere în cvadranturi, care este descrisă mai jos.

1. Etichetați-vă placa cu numele, data, secțiunea și organismul.
2. Utilizați procedurile BSL2 pentru a obține o buclă plină de organisme din tubul dvs. de bulion triptic de soia (TSB). Consultați protocolul privind tehnica aseptică.
   • Asigurați-vă că ați amestecat în mod adecvat tubul de bulion, astfel încât organismele să fie suspendate uniform în bulion.
3. Întoarceți tubul TSB.
4. Puteți face următoarea parte cu placa pe masa de laborator sau ținând-o în mână. Voi decideți ce funcționează cel mai bine. Trageți ușor bucla dvs. înainte și înapoi pe suprafața agarului. (Consultați figura 1.)
   • Cu cât trageți mai mult, cu atât mai multe bacterii depuneți.
   • Ideea generală este de a scădea concentrația de bacterii cu fiecare glisare.
   • Patru până la cinci zigzaguri par să funcționeze bine.
   • Experimentați cu diferitele dvs. plăci. Asigurați-vă că țineți evidența a ceea ce ați făcut pe fiecare placă.
5. Dacă folosiți un incinerator, sterilizați bucla. Dacă folosiți bucle de plastic, aruncați bucla folosită în containerul de cavicide și obțineți o nouă bucla de plastic sterilizată.
6. Nu vă întoarceți în tubul de bulion original.
7. Atingeți bucla pe suprafața agarului împotriva capătului îndepărtat al primei dungi. Repetați prin tragere înainte și înapoi.
   • o Nu trageți în centrul plăcii dumneavoastră.
   • o Ar trebui să puteți vedea ușoarele crestături ale liniei de striare pe suprafața agarului.
8. Utilizând o buclă sterilă, repetați procedura la a doua dungă.
9. Utilizând o buclă sterilă, repetați procedura la a treia dungă. Faceți un zigzag cu ultima parte în centrul plăcii.
   • Ar trebui să vă treziți cu colonii izolate undeva în ultima dungă.
10. Dacă folosiți un incinerator, sterilizați bucla. Dacă folosiți bucle din plastic, aruncați bucla folosită în containerul pentru cavicide.
11. Înlocuiți din nou capacul pe placă.
12. Așezați plăcile completate cu partea de agar în sus pe suportul de incubare de pe pupitrul din față în secțiunea de incubare.

Figura 1: Metoda de strecurare în cvadrant pentru izolare.

Note

• Este absolut esențial să vă sterilizați bucla între fiecare strecurare, fie prin utilizarea incineratorului, fie prin obținerea unei noi bucle de plastic sterile. Aceasta este cea mai frecventă greșeală pe care o fac studenții.
• Nu lăsați placa deschisă prea mult timp sau bacterii suplimentare din mediul înconjurător vor cădea în placa dumneavoastră.
• Nu fiți dezamăgit dacă nu obțineți colonii izolate la prima încercare. Aceasta este o procedură dificilă.