Protocol de colorare Verhoeff-Van Gieson (VVG) pentru fibrele elastice
NovaUltra Special Stain Kits
Descriere: Această metodă este utilizată pentru identificarea fibrelor elastice în țesuturi cum ar fi pielea, aorta etc. pe secțiuni fixate în formol și încorporate în parafină și poate fi utilizată și pentru secțiuni congelate. Fibrele elastice vor fi colorate în albastru-negru, iar fundalul va fi colorat în galben.
Fixare: 10% formalină.
Secțiune: secțiuni de parafină la 5 um.
Soluții și reactivi:
5% hematoxilină alcoolică:
Hematoxilină ———————————- 5 g
Alcool 100% ———————————- 100 ml
Se amestecă pentru a se dizolva cu ajutorul unei călduri ușoare. Se filtrează.
Clorură ferică apoasă 10% (se prepară proaspătă, nu este necesar):
Clorură ferică ——————————– 10 g
Apă distilată ——————————– 100 ml
Soluție de iod de Weigert:
Iodură de potasiu —————————— 2 g
Iod ——————————————- 1 g
Apă distilată ——————————— 100 ml
Se folosesc 4 ml de apă distilată pentru a dizolva iodura de potasiu. Și apoi adăugați iod. Odată ce iodul este dizolvat, diluați această soluție prin adăugarea a 96 ml de apă distilată. Această soluție poate fi preparată în stare proaspătă, în funcție de necesități, sau poate fi preparată în cantități mai mari și păstrată în flacon maro, la întuneric, la temperatura camerei.
Soluția de lucru a lui Verhoeff:
Soluția de lucru pentru colorare trebuie preparată proaspătă pentru rezultate optime. Ea nu se va colora satisfăcător dacă este păstrată mai mult de o zi de lucru. Se prepară soluția de lucru prin adăugarea în ordine a următorilor reactivi:
Hematoxilină alcoolică 5% ——————– 20 ml
Clorură ferică 10% —————————- 8 ml
Soluție de iod Weigert ——————- 8 ml
Se amestecă bine cantitățile de mai sus (sau proporțiile necesare ale acestora). Soluția trebuie să fie neagră ca jetul. Se utilizează imediat și se aruncă după utilizare.
2% clorură ferică apoasă (se prepară proaspătă, nu este necesar):
10% clorură ferică de mai sus ———— 10 ml
Apă distilată ——————————- 50 ml
5% tiosulfat de sodiu apos:
Contraculoare Van Gieson:
1% fuchsină acidă apoasă ——————— 5 ml
Acid picric apos saturat ————– 100 ml
Pentru țesuturile nervoase se poate prepara după cum urmează:
Fuchsină acidă apoasă 1% ——————- 15 ml
Acid picric apos saturat ————- 50 ml
Apă distilată ——————————- 50 ml
Procedură:
1. Se deparafinizează și se hidratează lamelele în apă distilată.
2. Se colorează în soluție Verhoeff timp de 1 oră. Țesutul trebuie să fie complet negru.
3. Se clătește în apă de la robinet cu 2-3 schimburi.
4. Se diferențiază în clorură ferică 2% timp de 1-2 minute.
5. Opriți diferențierea cu mai multe schimburi de apă de la robinet și verificați la microscop dacă există o colorare neagră a fibrelor elastice și un fond gri. Este mai bine să diferențiați ușor sub diferențierea țesutului, deoarece contracolorarea ulterioară cu Van Gieson poate extrage oarecum colorația elastică.
6. Se spală lamelele în apă de la robinet.
7. Se tratează cu tiosulfat de sodiu 5% timp de 1 minut. Aruncați soluția.
8. Se spală în apă curentă de la robinet timp de 5 minute.
9. Contrastanța în soluție Van Gieson timp de 3-5 minute.
10. Se deshidratează rapid prin alcool 95%, 2 schimburi de alcool 100%.
11. Se limpezesc în 2 schimburi de xilen timp de 3 minute fiecare.
12. Acoperiți suprafața cu mediu de montaj rășinos.