Verhoeff-Van Gieson (VVG) Farvningsprotokol for elastiske fibre
NovaUltra Special Stain Kits
Beskrivelse: Denne metode anvendes til identifikation af elastiske fibre i væv som f.eks. hud, aorta osv. på formalinfikserede, paraffinindlejrede sektioner og kan også anvendes til frosne sektioner. De elastiske fibre vil blive farvet blå-sort og baggrunden vil blive farvet gul.
Fixering: 10% formalin.
Snit: paraffinsnit på 5 um.
Løsninger og reagenser:
5% alkoholisk hæmatoxylin:
Hæmatoxylin ———————————- 5 g
100% alkohol ———————————- 100 ml
Blandes til opløsning ved hjælp af let varme. Filtrer.
10% vandigt jern(III)chlorid (tilberedes frisk, ikke nødvendigt):
Jernchlorid ——————————– 10 g
Destilleret vand ——————————– 100 ml
Weigert’s jodopløsning:
Kaliumjodid —————————— 2 g
Jod ——————————————- 1 g
Destilleret vand ——————————— 100 ml
Der anvendes 4 ml destilleret vand til opløsning af kaliumjodid. Derefter tilsættes jod. Når jodet er opløst, fortyndes denne opløsning ved at tilsætte 96 ml destilleret vand. Denne opløsning kan tilberedes frisk efter behov eller fremstilles i større mængder og opbevares i brun flaske i mørke ved stuetemperatur.
Verhoeffs arbejdsopløsning:
Arbejdsløsningen til farvning bør fremstilles frisk for at opnå de bedste resultater. Den farvelægger ikke tilfredsstillende, hvis den opbevares mere end en arbejdsdag. Arbejdsopløsningen tilberedes ved at tilsætte følgende reagenser i rækkefølge:
5% alkoholisk hæmatoxylin ——————– 20 ml
10% jern(III)chlorid —————————- 8 ml
Weigert’s jodopløsning ——————- 8 ml
Bland ovenstående mængder (eller de nødvendige proportioner heraf) godt. Opløsningen skal være kulsort. Anvendes straks og kasseres efter brug.
2% vandigt jern(III)chlorid (tilberedes frisk, ikke nødvendigt):
10% jern(III)chlorid fra ovenstående ———— 10 ml
Destilleret vand ——————————- 50 ml
5% vandigt natriumthiosulfat:
Van Giesons modfarve:
1% vandig sur fuchsin ——————— 5 ml
Mættet vandig pikrinsyre ————– 100 ml
Til nervøst væv kan fremstilles som følger:
Til nervøst væv kan fremstilles som følger:
1% vandig syrefuchsin ——————- 15 ml
Mættet vandig pikrinsyre ————- 50 ml
Destilleret vand ——————————- 50 ml
Fremgangsmåde:
1. Deparaffinering og hydrering af objektglas i destilleret vand.
2. Farves i Verhoeff’s opløsning i 1 time. Vævet skal være helt sort.
3. Skyl i ledningsvand med 2-3 skift.
4. Differentier i 2 % jern(III)chlorid i 1-2 minutter.
5. Stop differentieringen med flere skift af vandhanevand, og kontrollér mikroskopisk for sort farvning af elastiske fibre og grå baggrund. Det er bedre at underdifferentiere vævet en smule, da den efterfølgende Van Giesons modfarvning kan udtrække den elastiske farvning en smule.
6. Objektsglas vaskes i vandhanevand.
7. Behandles med 5% natriumthiosulfat i 1 minut. Smid opløsningen væk.
8. Vask i rindende ledningsvand i 5 minutter.
9. Modfarve i Van Giesons opløsning i 3-5 minutter.
10. Dehydreres hurtigt gennem 95 % alkohol, 2 skift i 100 % alkohol.
11. Klargør i 2 xylenskift i 3 minutter hver i 3 minutter.
12. Dækglas med harpiksholdigt indstøbningsmedium.