Verhoeff-Van Gieson (VVG) Staining Protocol for Elastic Fibers
NovaUltra Special Stain Kit
説明します。 本法は、ホルマリン固定、パラフィン包埋切片の皮膚、大動脈などの組織中の弾性線維の同定に使用され、凍結切片にも使用できます。 弾性線維は青黒く、背景は黄色に染色されます。
固定：10%ホルマリン
切片：5 umのパラフィン切片。
溶液と試薬。
5%アルコール性ヘマトキシリン：
ヘマトキシリン —————— 5 g
100% アルコール —————— 100 ml
優しく加熱して溶かすように混和する。 ろ過する。
10% 塩化第二鉄水溶液 (新鮮なものを用意する。必要ない):
塩化第二鉄 —————————- 10 g
蒸留水 —————————- 100 ml
Weigertのヨード液:
ヨウ化カリウム —————————— 2 g
ヨウ素 —————————— 1 g
蒸留水 ————————————————- 100 ml
蒸留水4mlを使ってヨウ化カリウムを溶かします。 そして、ヨウ素を加える。 ヨウ素が溶けたら、96 ml の蒸留水を加えてこの溶液を希釈する。 この溶液は必要に応じて新しく調製してもよいし、多めに作って茶色の瓶に入れて室温で暗所に保存してもよい。
Verhoeff’s Working Solution.の項参照。
Verhoeff’s Working Solution:作業染色液は、新鮮なうちに作り直すと効果的である。 1営業日以上保存すると、十分な染色ができない。 以下の試薬を順番に加え、作業溶液を調製してください。
5%アルコール性ヘマトキシリン ——————– 20 ml
10%塩化第二鉄 ————————— 8 ml
ワイガートヨード液 ——————- 8 ml
上記の量（またはその必要比率）をよく混合してください。 溶液は漆黒でなければならない。 すぐに使用し、使用後は廃棄してください。
2％塩化第二鉄水溶液（新しいものを用意する、必要ない）：
上記より10％塩化第二鉄 ———— 10 ml
蒸留水 —————————- 50 ml
5％チオ硫酸ナトリウム水溶液：
Van Giesonのカウンターステインを使用した場合。
1%酸性フクシン水溶液 ——————— 5 ml
飽和ピクリン酸 ————- 100 ml
神経組織用には、以下のように準備することができる。
1% acid fuchsin水溶液 ——————- 15 ml
Saturated aqueous picric acid ————- 50 ml
Distilled water ——————————- 50 ml
Procedure:
1. スライドを脱パラフィンし、蒸留水に浸漬する。
2. Verhoeffの溶液で1時間染色します。 組織は完全に黒くなります。
3. 水道水を2-3回取り替えてすすぎます。
4. 2%塩化第二鉄で1-2分間示差します。
5. 水道水を数回変えて分化を止め、顕微鏡で黒い弾性繊維の染色と灰色の背景を確認します。 その後のVan Giesonのカウンターステインで弾性染色が多少抽出されるため、組織はやや低めに分化させるのがよいでしょう。
6. スライドを水道水で洗います。
7. 5%チオ硫酸ナトリウムで1分間処理します。 溶液を捨てます。
8. 水道水の流水で5分間洗浄します。
9. Van Gieson’s solutionで3-5分間カウンターステインします。
10. 95%アルコールで素早く脱水し、100%アルコールに2回変更する
11. キシレンで2回、各3分ずつ洗浄します。 樹脂製マウントメディアでカバースリップします。