Nya drostanolonmetaboliter i mänsklig urin genom vätskekromatografi, time-of-flight tandem masspektrometri och deras tillämpning vid dopingkontroll

Drostanolon är en av de mest frekventa anabola androgena steroiderna som påträffas i dopingkontrollanalyser. Här studerade vi drostanolons urinmetaboliska profiler med hjälp av vätskekromatografi fyrdubbel time of flight-masspektrometri (LC-QTOF-MS) i full scan- och målinriktade MS/MS-lägen med noggrann massmätning. Läkemedlet administrerades till en frisk manlig volontär och vätske-vätskeextraktion tillsammans med direktinjektion användes för att analysera urinprover. Kromatografiska toppar för potentiella metaboliter identifierades med den teoretiska – som måljon i ett experiment med full skanning och faktiska deprotonerade joner analyserades i riktat MS/MS-läge. Elva metaboliter inklusive fem nya sulfater, fem glukuronidkonjugat och en fri metabolit bekräftades för drostanolon. På grund av avsaknaden av användbara fragmentjoner för att illustrera steroidringstrukturen hos drostanolons fas II-metaboliter användes gaskromatografisk masspektrometri (GC-MS) för att få strukturella uppgifter om den trimetylsilylerade fas I-metaboliten som frigörs efter enzymatisk hydrolys, och en potentiell struktur föreslogs med hjälp av en kombinerad MS-strategi. Metaboliternas detektionstider registrerades och S4 (2α-metyl-5α-androstan-17-one-6β-ol-3α-sulfat) och G1 (2α-metyl-5α-androstan-17-one-3α-glukuronid) ansågs vara nya potentiella biomarkörer för missbruk av drostanolon som kan detekteras upp till 24 dagar genom vätske-vätskeextraktion och 7 dagar genom analys med direktinjektion efter intramuskulär injektion. S4 och G1 upptäcktes också i två drostanolonpositiva rutinurinprover.