Verhoeff-Van Gieson (VVG) färgningsprotokoll för elastiska fibrer
NovaUltra Special Stain Kits
Beskrivning: Denna metod används för att identifiera elastiska fibrer i vävnader som hud, aorta etc. på formalinfixerade, paraffininbäddade sektioner, och kan även användas för frysta sektioner. De elastiska fibrerna färgas blåsvart och bakgrunden färgas gul.
Fixering: 10 % formalin.
Sektion: paraffinsnitt på 5 um.
Lösningar och reagenser:
5% alkoholiskt hematoxylin:
Hematoxylin ———————————- 5 g
100% alkohol ———————————- 100 ml
Blanda så att det löses upp med hjälp av mild värme. Filtrera.
10 % vattenhaltig järnklorid (förbered färsk, inte nödvändigt):
Järnklorid ——————————– 10 g
Destillerat vatten ——————————– 100 ml
Weigerts jodlösning:
Kaliumjodid —————————— 2 g
Jod ——————————————- 1 g
Destillerat vatten ——————————— 100 ml
Använd 4 ml destillerat vatten för att lösa upp kaliumjodid. Tillsätt sedan jod. När jodet är upplöst, späd denna lösning genom att tillsätta 96 ml destillerat vatten. Denna lösning kan beredas färsk vid behov eller göras i större mängder och förvaras i brun flaska i mörker i rumstemperatur.
Verhoeffs arbetslösning:
Arbetsfärgningslösningen bör framställas färsk för bästa resultat. Den färgar inte tillfredsställande om den förvaras mer än en arbetsdag. Bered arbetslösningen genom att i tur och ordning tillsätta följande reagenser:
5% alkoholiskt hematoxylin ——————– 20 ml
10% järnklorid —————————- 8 ml
Weigert’s jodlösning ——————- 8 ml
Blanda ovanstående mängder (eller nödvändiga proportioner av dessa) väl. Lösningen ska vara kolsvart. Använd omedelbart och kassera efter användning.
2% vattenhaltig järnklorid (förbered färsk, inte nödvändigt):
10% järnklorid från ovan ———— 10 ml
Destillerat vatten ——————————- 50 ml
5% vattenhaltigt natriumtiosulfat:
Van Giesons motfärgning:
1% vattenhaltigt surt fuchsin ——————— 5 ml
Mättad vattenhaltig pikrinsyra ————– 100 ml
För nervösa vävnader kan prepareras på följande sätt:
1% vattenbaserad syrafuchsin ——————- 15 ml
Mättad vattenbaserad pikrinsyra ————- 50 ml
Destillerat vatten ——————————- 50 ml
Förfarande:
1. Avparaffinera och hydrera objektglasen i destillerat vatten.
2. Färga i Verhoeffs lösning i 1 timme. Vävnaden ska vara helt svart.
3. Skölj i kranvatten med 2-3 byten.
4. Differentiera i 2 % järnklorid i 1-2 minuter.
5. Stoppa differentieringen med flera byten av kranvatten och kontrollera mikroskopiskt för svart färgning av elastiska fibrer och grå bakgrund. Det är bättre att differentiera vävnaden något för lite, eftersom den efterföljande Van Giesons motfärgningen kan extrahera den elastiska färgningen något.
6. Tvätta objektglasen i kranvatten.
7. Behandla med 5 % natriumtiosulfat i 1 minut. Kasta lösningen.
8. Tvätta i rinnande kranvatten i 5 minuter.
9. Motfärga i Van Giesons lösning i 3-5 minuter.
10. Dehydratisera snabbt genom 95 % alkohol, 2 byten av 100 % alkohol.
11. Klargör i 2 byten xylen i 3 minuter vardera.
12. Täckglas med hartsinläggningsmedium.